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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 做基因表达采用荧光定量PCR的步骤
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cherish-木

金虫 (小有名气)

[求助] 做基因表达采用荧光定量PCR的步骤 已有1人参与

时下要做果实苯丙烷代谢中关键酶的基因表达，想请教有经验的前辈，该做些什么准备工作，从哪步做起？想采用荧光定量PCR，还不清楚其中的步骤，看过一些硕士论文和期刊等，都是先做克隆然后做表达，我想知道我能不能直接做表达不做克隆。
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最爱是特别
1楼 2014-04-07 17:11:15
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cherish-木(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-08 08:36:06
cherish-木: 金币+9 2014-04-08 13:17:56
你若有该基因的序列（即该物种该基因网上有序列），可以不用克隆。根据序列设计你所需要的定量引物。定量没这么复杂，你多问问你周围做过的就很容易上手了。
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hehe
2楼2014-04-08 08:11:14
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cherish-木

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-04-08 08:11:14
你若有该基因的序列（即该物种该基因网上有序列），可以不用克隆。根据序列设计你所需要的定量引物。定量没这么复杂，你多问问你周围做过的就很容易上手了。

感谢你的回复。
恩，那我如果想做杏子的，然后现在目的基因的序列如果有其他水果类的我能直接用么？还有那个，必须是有已知的序列才能不克隆直接做表达么？因为我不是相关专业的，所以对这里面的知识一窍不通，学起来很吃力，你能详细解答一下么？谢谢啦，
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最爱是特别
3楼2014-04-08 13:23:17
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cherish-木 at 2014-04-08 13:23:17
感谢你的回复。
恩，那我如果想做杏子的，然后现在目的基因的序列如果有其他水果类的我能直接用么？还有那个，必须是有已知的序列才能不克隆直接做表达么？因为我不是相关专业的，所以对这里面的知识一窍不通，学 ...

其它水果类，同源性不是很高吧。你可以根据其他水果类设计保守引物扩增一下，根据杏子的序列设计定量引物。
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hehe
4楼2014-04-09 08:03:11
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