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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA引物用什么溶解
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bnusysj

新虫 (小有名气)

[求助] DNA引物用什么溶解

最近小弟有点迷惑，DNA引物该用什么溶解。刚开始的时候，用TE，但后来发现TE对酶的活性有很大影响，所以想改用Tris，但又不知道Tris在-20℃的pH会是多少。担心会不会由于温度的剧烈变化，在室温时pH=7.4的Tris在低温时的pH会有比较大的变化呢？请各位同道中人指教。
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1楼 2012-12-14 10:12:19
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回帖置顶 ( 共有1个 )

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 回帖置顶 2012-12-14 14:37:08
1949stone: MolEPI+1, 好说加您为专家呢 原来都是斑竹了 就差一天老大同意了 2012-12-14 14:37:49
引物稀释及保存
1．干粉引物溶解
收到引物后，在开启离心管盖前先在3000-4000转/分钟的转速下离心1分钟，以防开盖时引物干粉散失(因为引物包装时，一般是负压)。引物保存在高浓度的状况下比较稳定(请参考生化书，DNA溶解曲线那一章节)。如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，可以分装，避免反复冻融。引物一般配制成母液100uM保存，再稀释成10uM的工作浓度。稀释时只需用无核酸酶的双蒸水将引物干粉溶解即可。

2. 引物保存
◆干燥制品很稳定，常温下数个月无问题。但为保证万无一失，最好放置于- 20 ℃保存；
◆溶解后的溶液DNA短期内(1～2 周)使用可放置在4 ℃下，长期保存请放置于- 20 ℃；
◆如果对实验的重复性要求较高，合成的OD数较大，建议分装，避免反复冻融；
◆荧光标记引物请避光保存。
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
7楼2012-12-14 14:06:39
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普通回帖

harmony999

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用tris就可以啊,我们实验室都是这样做的.还有就是-20°下已经结冰了吧,还有PH这一说吗.......
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2楼2012-12-14 10:22:57
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转基因猴子

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我直接用ddH2O，没出现过什么问题。
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我还年轻，我要上路！
3楼2012-12-14 10:26:01
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静安jingan

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们实验室也都是用ddH2O溶解的啊，还木有发现问题呢
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让复杂的事情变简单，简单的事情更简单
4楼2012-12-14 11:28:03
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stewart3261

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要用TE，我也用过TE，结果就没有P出东西来。用depc处理过的水就可以了。我们一直都用DEPC处理水来处理引物！
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5楼2012-12-14 12:22:28
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看天

木虫 (知名作家)
dd?
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戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
6楼2012-12-14 13:29:16
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gdj363702043

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
去离子水    说得那么复杂毛用
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加油努力
8楼2012-12-16 15:04:34
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wansanlian

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用去离子水就行了，你要是太提心用ＤＥＰＣ处理过的　双蒸水呗
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乱花渐欲迷人眼
9楼2012-12-16 17:38:43
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