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cherish-木

金虫 (小有名气)

[求助] 做基因表达采用荧光定量PCR的步骤 已有1人参与

时下要做果实苯丙烷代谢中关键酶的基因表达,想请教有经验的前辈,该做些什么准备工作,从哪步做起?想采用荧光定量PCR,还不清楚其中的步骤,看过一些硕士论文和期刊等,都是先做克隆然后做表达,我想知道我能不能直接做表达不做克隆。
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by cherish-木 at 2014-04-08 13:23:17
感谢你的回复。
恩,那我如果想做杏子的,然后现在目的基因的序列如果有其他水果类的我能直接用么?还有那个,必须是有已知的序列才能不克隆直接做表达么?因为我不是相关专业的,所以对这里面的知识一窍不通,学 ...

其它水果类,同源性不是很高吧。你可以根据其他水果类设计保守引物扩增一下,根据杏子的序列设计定量引物。
hehe
4楼2014-04-09 08:03:11
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
cherish-木(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-04-08 08:36:06
cherish-木: 金币+9 2014-04-08 13:17:56
你若有该基因的序列(即该物种该基因网上有序列),可以不用克隆。根据序列设计你所需要的定量引物。定量没这么复杂,你多问问你周围做过的就很容易上手了。
hehe
2楼2014-04-08 08:11:14
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cherish-木

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-04-08 08:11:14
你若有该基因的序列(即该物种该基因网上有序列),可以不用克隆。根据序列设计你所需要的定量引物。定量没这么复杂,你多问问你周围做过的就很容易上手了。

感谢你的回复。
恩,那我如果想做杏子的,然后现在目的基因的序列如果有其他水果类的我能直接用么?还有那个,必须是有已知的序列才能不克隆直接做表达么?因为我不是相关专业的,所以对这里面的知识一窍不通,学起来很吃力,你能详细解答一下么?谢谢啦,
最爱是特别
3楼2014-04-08 13:23:17
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