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荧光定量PCR与巢式PCR能结合吗？主要怕扩增出同源基因。
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背景 我要用qRT-PCR检测一个转进去基因的表达，但是那个基因已经被发现在目标植物中有三个同源基因，而且同源性特别高，碱基的相似性差不多有百分之九十左右。疑问1：巢式PCR似乎可以应对于这种相似性高的基因之间的区别，我也有搜到有文章有人把这个巢式PCR和荧光定量PCR结合，就是在巢式第一次PCR之后，稀释产物，再做第二次PCR，第二次PCR中加入taqman探针用荧光定量PCR仪检测。但是我不明白的是这种方法里，第一次PCR时，产物的量会不会到20几个循环或者若干后循环后就达到一个阈值了。那第二次PCR的时候，信号不就不准了吗? 疑问2：不用巢式PCR，直接就设计一对引物，然后用taqman探针法来做荧光定量在我的实验中可行吗？   如果可行的话，为啥人家还要用两种方法联合呢。。。另外，或者请高手们指教一下有什么别的好的方法啊，别人在遇到这种同源性基因多的荧光定量的时候一般都是咋干的呀。 新手，大家不吝赐教！ |
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