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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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纠结的面包

新虫 (初入文坛)

[求助] 直接用DNA为模板进行荧光定量PCR可行吗? 已有3人参与

作为刚接触分子生物的小白,老板也不太了解荧光定量PCR,只是给出任务说要用类似的方法检测土壤中产CA功能菌及CA表达的变化情况。因为土壤中提取RNA难度太高,所以放弃了检测CA表达量的变化,在看了相关文献后,看到有人说可以直接提取宏基因组,然后以特定功能基因为模板进行PCR之后制作质粒,通过和标准品CT值的对比可以得出功能菌的丰度变化情况,请问可行吗?
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纠结的面包

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by biot at 2014-09-08 19:58:38
完全可行,你要提取尽量高质量的DNA,设计好引物,构建好质粒标准品,最后可计算出拷贝数

谢谢!如果可能的话有没有相关的文献推荐?麻烦了
3楼2014-09-09 09:14:36
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biot

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-08 20:05:28
纠结的面包: 金币+1 2014-09-13 01:34:43
完全可行,你要提取尽量高质量的DNA,设计好引物,构建好质粒标准品,最后可计算出拷贝数

[ 发自小木虫客户端 ]
扬帆起航!
2楼2014-09-08 19:58:38
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xipha

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-09-09 09:54:04
纠结的面包: 金币+1 2014-09-13 01:34:50
用DNA的话, 测该菌的量是可以的. 如果你的CA(不知道是什么)是蛋白或者功能蛋白产物,用DNA是无法得到表达量变化的.
4楼2014-09-09 09:29:27
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纠结的面包

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xipha at 2014-09-09 09:29:27
用DNA的话, 测该菌的量是可以的. 如果你的CA(不知道是什么)是蛋白或者功能蛋白产物,用DNA是无法得到表达量变化的.

CA是碳酸酐酶,老板的意思是既然酶的表达量测定不出来,就想验证下产CA的典型菌的丰度和溶蚀量是不是成正比,目前是在研究一株从当地土壤中筛选出来的细菌,想着设计引物对CA基因进行PCR后制作质粒,通过和标准品曲线的比对得出这种细菌含量随季节的变化,应该是可行的吧?
5楼2014-09-09 16:15:02
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