应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长 。。。
51/1返回列表
查看: 1663  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

juan_819

铁虫 (初入文坛)

[求助] 本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长 。。。 已有4人参与

我已经设计了两对引物。第一对做的不太成功。第二对今天早上做了一下可以扩出来一些。在1500bp附近有我需要的目的基因，但是我用早上的产物做二次扩增的时候却怎么也做不出来了。只有引物二聚体。想问一下，如果改用LAtaq酶会不会效果好一些，在引物、镁离子等浓度上有什么需要注意的地方，希望各位指点一下，谢谢。

本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长 。。。
上午做梯度的结果


本人分子生物小白一枚，刚刚开始做pcr，目前在扩cDNA的全长 。。。-1
用第四第五管做二次pcr的结果
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-04-15 16:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

慕辰sherry

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Sunshine092 at 2015-04-15 16:54:05
有引物二聚体可以尝试提高一下退火温度，目的条带暗可以增加循环数，至于说用pcr产物做模板继续pcr一般是需要稀释产物之后再做二次pcr。

我已经用40个循环了，还可以在继续加么
赞一下 回复此楼
4楼2015-04-15 17:08:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

Sunshine092

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-15 22:06:12
有引物二聚体可以尝试提高一下退火温度，目的条带暗可以增加循环数，至于说用pcr产物做模板继续pcr一般是需要稀释产物之后再做二次pcr。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-04-15 16:54:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjasaa

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-15 22:06:29
两次都是引物加太多了，一轮PCR出来目的片段就很少，大部分都是二聚体，用这个做模板没有条带也正常。
建议一轮PCR重做，减少引物量。
赞一下 回复此楼
WWW.ABMGOOD.COM
3楼2015-04-15 16:56:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

慕辰sherry

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wjasaa at 2015-04-15 16:56:39
两次都是引物加太多了，一轮PCR出来目的片段就很少，大部分都是二聚体，用这个做模板没有条带也正常。
建议一轮PCR重做，减少引物量。

我现在用的体系是50μl
ddH2O27.75μl
Buffer    5μl
Mg2+    4μl
dNTP    4μl
引物F    2μl
      R    2μl
rTaq     0.25μl
DNA5μl
请问哪里需要改进的谢谢啦
赞一下 回复此楼
5楼2015-04-15 17:15:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0805 316求调剂 +6 大雪深藏 2026-03-18 6/300 2026-03-24 22:13 by peike
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +4 cccchenso 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:00 by 徐ckkk
[考研] 327求调剂 +5 prayer13 2026-03-23 5/250 2026-03-23 22:11 by 星空星月
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +5 葵梓卫队 2026-03-18 7/350 2026-03-23 16:26 by lingjue
[考研] 317求调剂 +12 申子申申 2026-03-19 18/900 2026-03-22 22:23 by luoyongfeng
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 287求调剂 +8 晨昏线与星海 2026-03-19 9/450 2026-03-22 17:01 by i_cooler
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-20 7/350 2026-03-21 19:05 by 15709483992
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 材料学硕333求调剂 +3 北道巷 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:17 by 学员8dgXkO
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 266求调剂 +3 哇呼哼呼哼 2026-03-20 3/150 2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 一志愿华南师大 070300（化学）304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:15 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭