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关于测序结果碱基丢失 已有5人参与
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实验终目的是做细胞定位，根据CDS序列设计引物，提拟南芥WT的RNA再反转成cDNA，由此扩目的片段，条带大小也正确，不到700bp。送去测序的是质粒（把目的片段和Blunt载体连上，在kana板上长的就不太好，大概只长出了3个菌落，菌p条带是正确的），结果测序结果显示在219-221丢失了3个碱基（DNAman分析）。第一次测序时是直接测的胶回收后的目的片段，没连blunt；第二次师兄说最好连上载体，但两次测序结果一样，都是丢失了3个碱基。 像这种突变说是发生概率不高，实在是不知道为什么，接下来我预想采取的措施是：1、换个公司重测下质粒 2、重新挑菌再提质粒 3、重新扩目的片段不知大家还有什么更好的办法或我在实验中需要注意什么，第一次构建就卡在了开头，科研真心不易，谢谢大家，祝大家实验顺利！ |
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