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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒测序，结果只有几十个碱基
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urbest

金虫 (正式写手)

[求助] 质粒测序，结果只有几十个碱基已有1人参与

自己抽质粒送测序，测序结果只有二十几bp，然后就戛然而止，重复了几次都是这样，请问这是什么原因？
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1楼2014-06-02 13:34:10
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是构建重组质粒转化后筛的转化子提的质粒测序的？提出来的质粒和空载跑电泳比大小或者酶切检测过没？
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大家相互帮助哈
2楼2014-06-02 14:08:03
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urbest

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by luwei13566 at 2014-06-02 14:08:03
你是构建重组质粒转化后筛的转化子提的质粒测序的？提出来的质粒和空载跑电泳比大小或者酶切检测过没？

质粒是从addgene买的，买回来，挑单克隆、摇菌、抽质粒，就送测序了
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3楼2014-06-02 14:17:33
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+5, 鼓励交流！ 2014-06-02 23:54:23
引用回帖:
3楼: Originally posted by urbest at 2014-06-02 14:17:33
质粒是从addgene买的，买回来，挑单克隆、摇菌、抽质粒，就送测序了...

既然你要测序那说明你买的质粒应该有你需要的序列。
1.你对质粒做个酶切跑电泳检测下你提取的质粒大小和你要求的大小是否一致。如果大小都不一样那就是公司的问题。
2.你买的这个质粒测序用的是通用引物还是你自己的引物测序的。测序结果只有20多个bp，还是除了载体上的序列外有20多bp？你要测序的序列应该是多少bp？你看下质粒图谱确认下你要的序列确实在测序所用引物之间，如果确认过而且用的通用引物测序那就是质粒本身的问题。

如果上面两点你都做了，你就把电泳图和测序结果发给公司要求他们重新筛查他们产品的正确性并重新发货！
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大家相互帮助哈
4楼2014-06-02 15:19:06
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