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okletsgo

新虫 (初入文坛)

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[求助] RACE拼接后扩增全长的测序结果不一样已有4人参与

做完RACE后拼接得到序列的电子全长，根据电子全长设计引物扩增序列全长，挑了若干单菌落进行测序，每个测序结果之间不完全一致，有几个碱基的差异，和拼接出来的电子全长也有差异，想问一下该用哪一条序列作为后续实验的标准？

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1楼 2014-05-07 11:41:44

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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

应助: 74 (初中生)
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性别: GG
专业: 遗传学与生物信息学

我也在做这个，同求！…………

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青山不断，绿水长流

2楼2014-05-07 11:46:05

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Neo2000

木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 15:33:52

应该是扩增过程中引入的点突变，用好点的酶做，循环数不要太多，多测几个平行克隆

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3楼2014-05-07 12:05:31

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gyesang

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

“每个测序结果之间不完全一致，有几个碱基的差异”
这个是你PCR的问题，建议用高保真酶来做，同时降低PCR循环

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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com

4楼2014-05-07 15:34:41

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liutonglu

金虫 (正式写手)

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专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

两种可能，一种如上，另一种是木本类等多年生植物，积累了太多突变。至于用哪个，具体情况具体分析。

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5楼2014-05-07 17:40:54

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oylb

禁言 (正式写手)

感谢参与，应助指数 +1

本帖内容被屏蔽

6楼2014-05-07 22:07:55

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