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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » RACE拼接后扩增全长的测序结果不一样
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okletsgo

新虫 (初入文坛)

[求助] RACE拼接后扩增全长的测序结果不一样 已有4人参与

做完RACE后拼接得到序列的电子全长，根据电子全长设计引物扩增序列全长，挑了若干单菌落进行测序，每个测序结果之间不完全一致，有几个碱基的差异，和拼接出来的电子全长也有差异，想问一下该用哪一条序列作为后续实验的标准？
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1楼 2014-05-07 11:41:44
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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主
我也在做这个，同求！…………

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青山不断，绿水长流
2楼2014-05-07 11:46:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-07 15:33:52
应该是扩增过程中引入的点突变，用好点的酶做，循环数不要太多，多测几个平行克隆

[ 发自小木虫客户端 ]
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3楼2014-05-07 12:05:31
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
“每个测序结果之间不完全一致，有几个碱基的差异”
这个是你PCR的问题，建议用高保真酶来做，同时降低PCR循环
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2014-05-07 15:34:41
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liutonglu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
两种可能，一种如上，另一种是木本类等多年生植物，积累了太多突变。至于用哪个，具体情况具体分析。
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5楼2014-05-07 17:40:54
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oylb

禁言 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2014-05-07 22:07:55
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