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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » "测序完成，结果双峰" 这样的结果需要重新PCR ，重新测序吗？
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sponey

银虫 (小有名气)

[交流] "测序完成，结果双峰" 这样的结果需要重新PCR ，重新测序吗？ 已有7人参与

如题，"测序完成，结果双峰"  这样的结果需要重新PCR ，重新测序吗？
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说你什么好呢。。。
1楼 2012-11-09 10:05:18
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chenguestc

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
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小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-09 14:26:54
你是PCR产物测序还是连入载体提质粒后测序的？
如果是前者，可能是你的PCR产物是几个分子量相同或相近的带的混合物，或许是由于你的实验材料是多倍体的原因？？
如果是后者，我没见过如此现象，唯一可能的是你挑菌的时候挑的不是单菌落有可能
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2楼2012-11-09 12:41:07
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wangwenxia16

金虫 (正式写手)
你挑的应该不是单克隆
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3楼2012-11-09 12:42:24
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
重新PCR，最好连接T载体，挑取单克隆再次送样测序
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4楼2012-11-09 12:49:42
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391849270

金虫 (正式写手)
重测

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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TMD发文章才是王道
5楼2012-11-09 13:03:35
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zoeye

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
建议参看英俊测序说明
双峰主要有一下几个情况 如图

双峰.jpg
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6楼2012-11-11 00:01:08
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lxbxk

木虫 (正式写手)
★
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可能还有一点需要考虑，如果你用的是PETDUET1系列的载体的话，用T7启动子通用引物测序是肯定会出现双峰的，因为这个载体带有两个T7启动子区域，请参考。
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做开心的自己，加油
7楼2012-11-11 00:09:01
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维可

新虫 (初入文坛)
★
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如果是PCR产物直接测序，那就是你的目的片段存在多态性，最好是连载体，挑单克隆去测序。
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8楼2013-01-17 19:04:22
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维可

新虫 (初入文坛)
我之前就遇到这种情况过，后来做克隆就发现，1个样品5个菌落的测序结果都有部分碱基是不一样的。估计楼主也是这种情况吧。
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9楼2013-01-17 19:05:43
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