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sponey

银虫 (小有名气)

[交流] "测序完成,结果双峰" 这样的结果需要重新PCR ,重新测序吗?已有7人参与

如题,"测序完成,结果双峰"  这样的结果需要重新PCR ,重新测序吗?
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说你什么好呢。。。
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chenguestc

木虫 (职业作家)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-11-09 14:26:54
你是PCR产物测序还是连入载体提质粒后测序的?
如果是前者,可能是你的PCR产物是几个分子量相同或相近的带的混合物,或许是由于你的实验材料是多倍体的原因??
如果是后者,我没见过如此现象,唯一可能的是你挑菌的时候挑的不是单菌落有可能
2楼2012-11-09 12:41:07
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wangwenxia16

金虫 (正式写手)

你挑的应该不是单克隆
3楼2012-11-09 12:42:24
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
重新PCR,最好连接T载体,挑取单克隆再次送样测序
4楼2012-11-09 12:49:42
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391849270

金虫 (正式写手)

重测

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
TMD发文章才是王道
5楼2012-11-09 13:03:35
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zoeye

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
建议参看英俊测序说明
双峰主要有一下几个情况 如图

双峰.jpg

6楼2012-11-11 00:01:08
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lxbxk

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能还有一点需要考虑,如果你用的是PETDUET1系列的载体的话,用T7启动子通用引物测序是肯定会出现双峰的,因为这个载体带有两个T7启动子区域,请参考。
做开心的自己,加油
7楼2012-11-11 00:09:01
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维可

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果是PCR产物直接测序,那就是你的目的片段存在多态性,最好是连载体,挑单克隆去测序。
8楼2013-01-17 19:04:22
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维可

新虫 (初入文坛)

我之前就遇到这种情况过,后来做克隆就发现,1个样品5个菌落的测序结果都有部分碱基是不一样的。估计楼主也是这种情况吧。
9楼2013-01-17 19:05:43
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