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fanwq258

木虫 (正式写手)


[交流] 测序结果显示连上了,但是序列不对,连上的序列数据库中找不到,怎么回事

如题,连上的序列数据库中根本找不到,怎么回事啊,连上去的是什么东西?
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三蛰

铜虫 (小有名气)


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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-09 08:51:29
fanwq258: 金币+5 2014-04-01 19:44:04
这个很多原因:
1,你用的Taq酶保真性不够,出现很多错配等等……
2,可能测序时出现了不少杂峰干扰,从而机器判读了许多错误的碱基。
3,可能你所扩增的序列没人提交过…………
我不会!
2楼2014-01-08 22:44:52
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20083630zhan

木虫 (正式写手)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-09 08:51:33
fanwq258: 金币+5 2014-04-01 19:43:59
我前一段时间也出现这种情况,原因是
1:你的PCR引物设计的不好,有杂带,
2:还有就是你在纯化的时候没有纯化完全,载体与你的杂带连接,这些都有可能:。
建议你在连接之前先将你的PCR产物纯化一下(电泳回收或者是PCR产物纯化试剂盒),纯化完之后取1-2ul电泳看看有没有杂带
3楼2014-01-09 08:13:32
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张宏宇123

金虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-09 08:51:37
你连接的片段上有没有常用的酶切位点,可以切一切看,如果跟你预期的大小相同,有可能是对的,如果切不对,就有可能是错的。
还有你扩增产物特异性高不高,如果不高的话建议改变一下扩增程序,特异性高的产物正确率较高一些。
未来不是梦
4楼2014-01-09 08:42:04
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