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mingcui1003

新虫 (初入文坛)

[求助] 请求帮匹配一下DGGE条带测序后的序列是属于什么类型的真菌

各位大侠,能不能请求帮我匹配一下以下的碱基序列属于哪类真菌?序列的测序结果是390bp左右的真菌PCR产物,通过DGGE割胶后的测序结果,由于还来不及学习这方面的知识,有谁能先帮我处理一下,看看能不能匹配出来是属于什么类型的真菌?以决定我后面的实验计划,将不胜感激!
测序序列:
AGGGTTAAGAGGCAGGGACGTAATCAACGCGAGCTGATGACTCGCGCTTACTAGGAATTCCTCGTTCATGACCAATAATTGCAATGGTCAATCCCCATCACGATAAAGTTTCAAAAGATTGCCCAGACCTTCCGGTCAAGGTGAATACTCGCTGACTTTATCAGTGTAGCGCGCGTGCGGCCCAAAACATCTAAGGGCATCACAAACCTGTTATTGCCTCAAACTTCCATCTATTAAACATAGATAGTCCCTCTAAGAAGACGACGCCCACCAAAGTGAACGCTTCTAGTTAGCAGGTTAAGGTCTCTTCGTTATCGAAAGAGAATCCTAAAACCCCTGTGGCCTACTCGAGTCTCCTGGATGAGAGTATAAGGGTGAATTGATGACATTATATC
测序报告上说,前面的50个碱基由于受到荧光信号的干扰,可能不准确。
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xwkhj

木虫 (小有名气)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-13 15:50:36
楼主的应该是18S 序列,前段序列还可以,后端的从317bp 之后就匹配不上了,没有显示出与那些可培养的真菌有较高的相似度,应该是现在还没有培养出来的真菌,而且还有不是主流的双核真菌,极有可能是壶菌门的真菌,如果楼主是通过可培养方法得到的话,挺不错的一个结果!
妈的,郁闷,帮别人应助文献,结果胶回收跑过了,天不佑我!
2楼2013-07-13 15:38:06
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mingcui1003

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by xwkhj at 2013-07-13 15:38:06
楼主的应该是18S 序列,前段序列还可以,后端的从317bp 之后就匹配不上了,没有显示出与那些可培养的真菌有较高的相似度,应该是现在还没有培养出来的真菌,而且还有不是主流的双核真菌,极有可能是壶菌门的真菌,如 ...

谢谢,序列是18S的,是不是直接在NCBI上进行一下nucleotide Blast就可以了啊,我也输进去看了一下,最高的为96%的相似性,描述说是不能培养的真菌,不知道是不是看这个?另外还请问一下要有多少个碱基相似才能说明就是这种菌?
3楼2013-07-13 21:27:05
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xwkhj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-14 11:05:39
mingcui1003: 金币+5, ★★★很有帮助, 谢谢你的帮助! 2013-08-16 15:15:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by mingcui1003 at 2013-07-13 21:27:05
谢谢,序列是18S的,是不是直接在NCBI上进行一下nucleotide Blast就可以了啊,我也输进去看了一下,最高的为96%的相似性,描述说是不能培养的真菌,不知道是不是看这个?另外还请问一下要有多少个碱基相似才能说明 ...

是的啊,这个主要是看序列的相似度,不是说具体有多少个碱基,一般定义到种的话都是选在97%以上的,你这个很有可能是新种,是的,比对的结果却是就是不可培养的真菌,另外如果你有400多个碱基,你用400乘以97%就可以了啊
妈的,郁闷,帮别人应助文献,结果胶回收跑过了,天不佑我!
4楼2013-07-13 21:53:16
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mingcui1003

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by xwkhj at 2013-07-13 21:53:16
是的啊,这个主要是看序列的相似度,不是说具体有多少个碱基,一般定义到种的话都是选在97%以上的,你这个很有可能是新种,是的,比对的结果却是就是不可培养的真菌,另外如果你有400多个碱基,你用400乘以97%就可 ...

谢谢指教,刚刚做这方面的实验,不怎么懂,又没人指导,就自己慢慢摸索,那我这个的匹配结果是不是这种微生物还没有命名,只有一个序列号,就可能是新种?我的样品是取自水生植物的沙土,后面还处理了很多不同的样品,根据这个结果其它样品还能不能拿去测序?
5楼2013-07-13 22:12:39
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xwkhj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-14 11:05:51
引用回帖:
5楼: Originally posted by mingcui1003 at 2013-07-13 22:12:39
谢谢指教,刚刚做这方面的实验,不怎么懂,又没人指导,就自己慢慢摸索,那我这个的匹配结果是不是这种微生物还没有命名,只有一个序列号,就可能是新种?我的样品是取自水生植物的沙土,后面还处理了很多不同的样 ...

这只是我基于你现在的ITS序列的测序结果来分析的,我们一般定义种的差异就在97%一下,你这个和所有的真菌种类都没有高于97的序列相似度,你是分出来的菌株提的DNA吗,你可以再测几个试试!
妈的,郁闷,帮别人应助文献,结果胶回收跑过了,天不佑我!
6楼2013-07-14 10:37:24
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mingcui1003

新虫 (初入文坛)

我是从混合样品里面提取的,测序时只做了单向测序,报告说不能保证100%的准确,这可能和测序时的误差也有关,要不到时做一下双向测序。
7楼2013-07-14 15:11:38
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xwkhj

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by mingcui1003 at 2013-07-14 15:11:38
我是从混合样品里面提取的,测序时只做了单向测序,报告说不能保证100%的准确,这可能和测序时的误差也有关,要不到时做一下双向测序。

你又不是自己分出来的菌株,测一个方向也就差不多了,我觉得,没必要浪费,不过你刚开始做,而且如果你老板很富裕,你就可以便宜点!
妈的,郁闷,帮别人应助文献,结果胶回收跑过了,天不佑我!
8楼2013-07-14 15:46:08
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liqingabcd

铜虫 (小有名气)

单向测序就足够了?你的引物是哪段,知道了你的引物,因为引物里面的GC含量很影响这样的测序的,再进行blast就比较准确了。
9楼2013-08-26 13:34:10
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nanjizhou91

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by xwkhj at 2013-07-14 10:37:24
这只是我基于你现在的ITS序列的测序结果来分析的,我们一般定义种的差异就在97%一下,你这个和所有的真菌种类都没有高于97的序列相似度,你是分出来的菌株提的DNA吗,你可以再测几个试试!...

请问,做dgge,还有测序,真菌用什么引物比较好呢?具体哪对呢?
期望与虫虫们交流学术问题
10楼2014-09-25 18:35:31
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