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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DGGE测序问题
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赵昕宇

银虫 (初入文坛)

[求助] DGGE测序问题

DGGE切胶之后，没有进行克隆，而是做了二次DGGE，然后切胶，再用去掉GC的引物进行一次PCR,最后用PCR产物拿去测序，这样能成功吗？？结果怎样？？非常感谢！
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1楼 2012-06-23 17:48:25
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-23 22:04:34
你做过这样的实验还是只是想法？我做过，效果很差。后来还是选择了克隆做出来的。
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2楼2012-06-23 21:29:10
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赵昕宇

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by uneei at 2012-06-23 21:29:10
你做过这样的实验还是只是想法？我做过，效果很差。后来还是选择了克隆做出来的。

我做了，但是还没拿出去测序，担心结果出不来，我时间有限，估计没时间做克隆了，差到什么程度呢？？肯定没戏了？？
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3楼2012-06-23 22:57:56
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mmulan

铜虫 (初入文坛)
这样做的话，有些序列可能测不出来，会有杂峰干扰。克隆虽然时间长点，但是基本上都能测出来。
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4楼2012-06-25 08:57:37
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赵昕宇

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mmulan at 2012-06-25 08:57:37
这样做的话，有些序列可能测不出来，会有杂峰干扰。克隆虽然时间长点，但是基本上都能测出来。

谢谢，要是失败只能再做一次克隆了。
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5楼2012-06-25 12:41:49
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 赵昕宇 at 2012-06-23 22:57:56
我做了，但是还没拿出去测序，担心结果出不来，我时间有限，估计没时间做克隆了，差到什么程度呢？？肯定没戏了？？...

当时拿去测序，套峰严重，他们那边说可能不止一种序列在里面，基本上算是测序失败。后来就放弃这个方法了。
你想做二次DGGE分离纯化，也得最后克隆再测序，不然估计还是很难得到好的结果。
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6楼2012-06-26 14:30:00
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