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赵昕宇

银虫 (初入文坛)

[求助] DGGE测序问题

DGGE切胶之后,没有进行克隆,而是做了二次DGGE,然后切胶,再用去掉GC的引物进行一次PCR,最后用PCR产物拿去测序,这样能成功吗??结果怎样??非常感谢!
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流问题。 2012-06-23 22:04:34
你做过这样的实验还是只是想法?我做过,效果很差。后来还是选择了克隆做出来的。
2楼2012-06-23 21:29:10
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赵昕宇

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by uneei at 2012-06-23 21:29:10
你做过这样的实验还是只是想法?我做过,效果很差。后来还是选择了克隆做出来的。

我做了,但是还没拿出去测序,担心结果出不来,我时间有限,估计没时间做克隆了,差到什么程度呢??肯定没戏了??
3楼2012-06-23 22:57:56
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mmulan

铜虫 (初入文坛)

这样做的话,有些序列可能测不出来,会有杂峰干扰。克隆虽然时间长点,但是基本上都能测出来。
4楼2012-06-25 08:57:37
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赵昕宇

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mmulan at 2012-06-25 08:57:37
这样做的话,有些序列可能测不出来,会有杂峰干扰。克隆虽然时间长点,但是基本上都能测出来。

谢谢,要是失败只能再做一次克隆了。
5楼2012-06-25 12:41:49
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 赵昕宇 at 2012-06-23 22:57:56
我做了,但是还没拿出去测序,担心结果出不来,我时间有限,估计没时间做克隆了,差到什么程度呢??肯定没戏了??...

当时拿去测序,套峰严重,他们那边说可能不止一种序列在里面,基本上算是测序失败。后来就放弃这个方法了。
你想做二次DGGE分离纯化,也得最后克隆再测序,不然估计还是很难得到好的结果。
6楼2012-06-26 14:30:00
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