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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接T载体转化
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记忆流年jk

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接T载体转化 已有3人参与

大家好，我PCR产物纯化后，连接T载体，转化后，用抗性筛选后的板子涂菌，培养16小时左右，挑单菌落培养后，做菌液PCR验证后，初步判定为阳性，提质粒，跑电泳验证后准备测序，电泳后发现条带不是我的目的质粒的大小，条带还不止一条，是怎么回事呢，大家能帮我解释下吗？谢谢
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1楼 2015-04-02 20:06:43
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Longnil

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-03 23:00:52
你提取的质粒可能出现三种构像：超螺旋、线形和开环。电泳时三者的速度大小为：超螺旋>线形>开环所以你会看到不止一条带。
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lifeisbeautiful
2楼2015-04-02 20:46:46
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记忆流年jk

新虫 (初入文坛)
谢谢，但是我并没有做酶切啊，还有就是这三条带一条都不是我的目的条带，遇到这种情况已经好多次了，郁闷呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2015-04-03 00:06:36
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ngd2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-03 23:01:26
我提质粒还没遇到过3个条带的情况。你试剂盒提质粒可能没有提好，再提一次，也有可能质粒降解，还有可能片段自连，T载体自连，同时导入细胞内了，，，，
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4楼2015-04-03 09:38:49
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记忆流年jk

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ngd2013 at 2015-04-03 09:38:49
我提质粒还没遇到过3个条带的情况。你试剂盒提质粒可能没有提好，再提一次，也有可能质粒降解，还有可能片段自连，T载体自连，同时导入细胞内了，，，，

谢谢
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5楼2015-04-03 22:54:20
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你提取的质粒可能出现三种构像：超螺旋、线形和开环。超螺旋也有可能不只是一种超螺旋，我曾经提出质粒发现只有5000bp，单酶切之后13Kb ,你可以试试单酶切之后质粒大小
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6楼2015-04-09 11:27:35
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