应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于pMD19-T载体连接转化问题
81/1返回列表
查看: 4330  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

转基因猴子

木虫 (正式写手)

[求助] 关于pMD19-T载体连接转化问题 已有4人参与

我PCR获得了我的目的基因片段，切胶回收后条带很纯很亮。之后我连接takara公司的pMD19-T simple vector，但是一直连接不上去。AMP是新配的，新倒的平板。怕自己做的感受态效率低，买的takara公司的DH5α感受态，按照其说明书上进行的转化。连接体系也是按照的说明书进行的。为什么一直是平板空空如也，神马也没有呢？重复好几次了！请教各位如何改进？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我还年轻，我要上路！
1楼 2014-05-08 08:09:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-08 12:14:01
你可以转个质粒试试，amp抗性的，检查下转化这套有问题没？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2014-05-08 08:15:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

转基因猴子

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-08 08:15:01
你可以转个质粒试试，amp抗性的，检查下转化这套有问题没？

是的，我尝试下。去年我做的时候很顺利，这套系统也很成熟。做一个成一个。然后隔了一段时间没做，今年就出现一直连不出来。如果对照长得很好，那可能是什么原因呢？
赞一下 回复此楼
我还年轻，我要上路！
3楼2014-05-08 08:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liutonglu

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-05-08 12:14:06
你用的是不是高保真酶？一般高保真产生平末端，要加一个加A的步骤才能进行连接。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-05-08 09:49:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

youlinglyw

荣誉版主 (著名写手)

一匡天下

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-05-08 12:14:12
转基因猴子: 金币+4 2014-05-28 11:21:06
根据你描述，你对这套系统很熟，那么现在这种情况下
可能会出现以下原因
1 PCR问题，你的PCR结果是否确信加上了A
2 你的纯化柱子是不是买了很久了？
3 你是买的dh5α感受态细胞呢还是这个菌株然后自己制作感受态？
赞一下 回复此楼
天行健
5楼2014-05-08 10:06:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wpwupingwp

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2014-05-08 12:14:17
转基因猴子: 金币+4 2014-05-28 11:21:01
1.用的酶有没有poly-A
2.过夜连接试试
3.用Control Vector试试 看是不是感受态细胞的问题
赞一下 回复此楼
南无观世音菩萨
6楼2014-05-08 10:37:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gzglmn

新虫 (初入文坛)
检测下回收的DNA再进行连接试验吧。
赞一下 回复此楼
总有一天我也会变得和你一样强。
7楼2014-06-20 09:04:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨仔儿

木虫 (著名写手)
你的目的基因与载体的量都加多少？
赞一下 回复此楼
8楼2015-06-23 16:02:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 转基因猴子 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭