24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2018  |  回复: 7

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

[求助] 关于T载连接的相关问题 已有2人参与

我是用的宝生物的Ex-TAq酶做的PCR,Ex-TAq酶可以在PCR反应产物后面加上A么?之前我做过几次,有几次没有长,我是按照说明书上连接的是30min,后来做了一次对照,即一个30min,一个连接过夜,结果连接30min的长了,过夜的反而没长,可是提取质粒的时候总是提不出来,不知道是什么原因。求大神指点!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

justloveinuyasha
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2014-01-10 23:19:32
love犬夜叉: 金币+3, 有帮助 2014-01-13 12:52:49
Ex-TAq可以在后面加A,你提质粒前菌落PCR结果好吗?有很多菌落会出现假阳性。T-载体我们一般16度联2个小时用的TAKALA pMD18-T。
hehe
2楼2014-01-10 20:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luzhouyue

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-10 23:19:44
love犬夜叉: 金币+2, 有帮助 2014-01-13 12:53:00
会带A的,你时间应该不够,我们都是晚上连接,第二天下午做转化
3楼2014-01-10 21:59:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-10 20:59:14
Ex-TAq可以在后面加A,你提质粒前菌落PCR结果好吗?有很多菌落会出现假阳性。T-载体我们一般16度联2个小时用的TAKALA pMD18-T。

没有做过菌落PCR,我是用的19-t,是连的时间不够么?感受态细胞会不会有影响?
justloveinuyasha
4楼2014-01-11 11:36:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by luzhouyue at 2014-01-10 21:59:17
会带A的,你时间应该不够,我们都是晚上连接,第二天下午做转化

但说明书上说30min就够了啊·······过夜的话时间是不是太长了些?
justloveinuyasha
5楼2014-01-11 11:36:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by love犬夜叉 at 2014-01-11 11:36:13
没有做过菌落PCR,我是用的19-t,是连的时间不够么?感受态细胞会不会有影响?...

你怎么验证是阳性菌的,蓝白斑筛选?建议你做个菌落PCR,确定阳性菌。理论上连接时间足够了。你可以稍微延长些。感受态有没有问题,你可以加个对照看看。
hehe
6楼2014-01-11 11:45:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

love犬夜叉

木虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-11 11:45:07
你怎么验证是阳性菌的,蓝白斑筛选?建议你做个菌落PCR,确定阳性菌。理论上连接时间足够了。你可以稍微延长些。感受态有没有问题,你可以加个对照看看。...

嗯,我是用的蓝白斑筛选··
justloveinuyasha
7楼2014-01-12 12:05:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

luzhouyue

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by love犬夜叉 at 2014-01-11 11:36:59
但说明书上说30min就够了啊·······过夜的话时间是不是太长了些?...

连接时间长点没什么关系吧
8楼2014-01-12 21:59:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 love犬夜叉 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +9 代fish 2026-04-09 9/450 2026-04-09 21:46 by bljnqdcc
[考研] 一志愿中南大学物理学,英一66,求调剂 +3 长烟旖旎 2026-04-08 4/200 2026-04-09 21:27 by wutongshun
[考研] 297求调剂 +22 ljy20040718! 2026-04-03 24/1200 2026-04-09 20:48 by yanenwang
[考研] 一志愿0703化学招61最终排名62化学求调剂 +16 招61排名62 2026-04-07 19/950 2026-04-09 20:44 by zhouxiaoyu
[考研] 本科郑州大学,一志愿华东师范大学282求调剂 +23 熊哥xtk 2026-04-07 26/1300 2026-04-09 17:17 by 18446523
[考研] 材料334求调剂 +21 Eecho# 2026-04-03 21/1050 2026-04-08 22:55 by 猪会飞
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂,接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 电子信息346 +4 zuoshaodian 2026-04-08 4/200 2026-04-08 11:54 by zzucheup
[考研] 调剂求助(生物与医药) +6 @6952 2026-04-06 6/300 2026-04-07 23:52 by lys0704
[考研] 材料调剂 +13 汉123456 2026-04-07 14/700 2026-04-07 22:53 by 来看流星雨10
[考研] 305分求调剂 +3 哈_哈_哈_哈_哈 2026-04-04 5/250 2026-04-07 14:49 by 哈_哈_哈_哈_哈
[考研] (调剂)一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 求调剂 +11 xzghyuj 2026-04-04 11/550 2026-04-06 11:49 by lijunpoly
[考研] 生物与医药086000调剂一志愿西北农林320分 +3 美美女士 2026-04-03 3/150 2026-04-05 21:55 by 学员8dgXkO
[考研] 311分 22408 求调剂 +3 bing_bot 2026-04-03 3/150 2026-04-05 00:43 by chongya
[考研] 368求调剂 +5 今华习 2026-04-03 7/350 2026-04-04 18:47 by imissbao
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
信息提示
请填处理意见