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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于T载连接的相关问题
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love犬夜叉

木虫 (小有名气)

[求助] 关于T载连接的相关问题 已有2人参与

我是用的宝生物的Ex-TAq酶做的PCR，Ex-TAq酶可以在PCR反应产物后面加上A么？之前我做过几次，有几次没有长，我是按照说明书上连接的是30min,后来做了一次对照，即一个30min,一个连接过夜，结果连接30min的长了，过夜的反而没长，可是提取质粒的时候总是提不出来，不知道是什么原因。求大神指点！
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justloveinuyasha
1楼 2014-01-10 20:18:55
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2014-01-10 23:19:32
love犬夜叉: 金币+3, ★有帮助 2014-01-13 12:52:49
Ex-TAq可以在后面加A，你提质粒前菌落PCR结果好吗？有很多菌落会出现假阳性。T-载体我们一般16度联2个小时用的TAKALA pMD18-T。
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hehe
2楼2014-01-10 20:59:14
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luzhouyue

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-10 23:19:44
love犬夜叉: 金币+2, ★有帮助 2014-01-13 12:53:00
会带A的，你时间应该不够，我们都是晚上连接，第二天下午做转化
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3楼2014-01-10 21:59:17
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love犬夜叉

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-10 20:59:14
Ex-TAq可以在后面加A，你提质粒前菌落PCR结果好吗？有很多菌落会出现假阳性。T-载体我们一般16度联2个小时用的TAKALA pMD18-T。

没有做过菌落PCR，我是用的19-t,是连的时间不够么？感受态细胞会不会有影响？
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justloveinuyasha
4楼2014-01-11 11:36:13
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love犬夜叉

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by luzhouyue at 2014-01-10 21:59:17
会带A的，你时间应该不够，我们都是晚上连接，第二天下午做转化

但说明书上说30min就够了啊·······过夜的话时间是不是太长了些？
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justloveinuyasha
5楼2014-01-11 11:36:59
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by love犬夜叉 at 2014-01-11 11:36:13
没有做过菌落PCR，我是用的19-t,是连的时间不够么？感受态细胞会不会有影响？...

你怎么验证是阳性菌的，蓝白斑筛选？建议你做个菌落PCR，确定阳性菌。理论上连接时间足够了。你可以稍微延长些。感受态有没有问题，你可以加个对照看看。
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hehe
6楼2014-01-11 11:45:07
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love犬夜叉

木虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-01-11 11:45:07
你怎么验证是阳性菌的，蓝白斑筛选？建议你做个菌落PCR，确定阳性菌。理论上连接时间足够了。你可以稍微延长些。感受态有没有问题，你可以加个对照看看。...

嗯，我是用的蓝白斑筛选··
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justloveinuyasha
7楼2014-01-12 12:05:33
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luzhouyue

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by love犬夜叉 at 2014-01-11 11:36:59
但说明书上说30min就够了啊·······过夜的话时间是不是太长了些？...

连接时间长点没什么关系吧
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8楼2014-01-12 21:59:20
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