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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 基因连接末端 是T载体好，还是用限制末端好
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飞扬~~~

新虫 (小有名气)

[求助] 基因连接末端 是T载体好，还是用限制末端好

基因连接末端 是T载体好，还是用限制末端好，我刚入门，想请教各位
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1楼 2013-09-04 10:01:10
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hua_geduo

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-04 22:44:29
看你后面的目的是做什么了，如果只是克隆测序T载体就行了
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2楼2013-09-04 10:05:23
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飞扬~~~

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hua_geduo at 2013-09-04 10:05:23
看你后面的目的是做什么了，如果只是克隆测序T载体就行了

后面要做基因重组，不光要克隆测序，而且是三个基因连续连接到载体上，那用哪个好？
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3楼2013-09-04 10:36:39
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
如果你不是做大量克隆或者测序，一般是直接设计酶切位点做连接的，这样可以省去一个酶切连接转化的过程。
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4楼2013-09-05 01:51:34
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飞扬~~~

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-05 01:51:34
如果你不是做大量克隆或者测序，一般是直接设计酶切位点做连接的，这样可以省去一个酶切连接转化的过程。

怎么能省去一个酶切连接转化过程？不明白
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5楼2013-09-05 09:10:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 飞扬~~~ at 2013-09-05 09:10:34
怎么能省去一个酶切连接转化过程？不明白...

如果克隆到T载体不是最终载体，还是要酶切下来连到其它载体里面，如果设计酶切位点，可以直接连到后面要用的载体，省去把目的片段从T载体切下来再连接的一步。
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6楼2013-09-05 09:13:01
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飞扬~~~

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-05 09:13:01
如果克隆到T载体不是最终载体，还是要酶切下来连到其它载体里面，如果设计酶切位点，可以直接连到后面要用的载体，省去把目的片段从T载体切下来再连接的一步。...

谢谢，大部分还是设计酶切位点的 了?
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7楼2013-09-05 09:18:13
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以先连接到T载体上，经测序正确无误后，在设计带酶切位点的引物，以T载体为模板，得到带酶切位点的目的片段，酶切后构建后面的载体，可以保障载体构建的正确性
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自主创业者，捣腾生物试剂
8楼2013-09-05 10:34:53
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飞扬~~~

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 2008101111 at 2013-09-05 10:34:53
可以先连接到T载体上，经测序正确无误后，在设计带酶切位点的引物，以T载体为模板，得到带酶切位点的目的片段，酶切后构建后面的载体，可以保障载体构建的正确性

谢谢
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9楼2013-09-05 12:21:40
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loveskyzhou

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
限制性位点比较好，也容易连~
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我会绕一个圈，走回到实验室
10楼2013-09-05 12:36:45
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