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sunkai0719

铜虫 (初入文坛)

[求助] 连接T载体的序列可能对大肠杆菌致死,一直转化不出来,有解吗? 已有4人参与

各位同仁大家好,我在扩一段来自病毒的一个基因,该基因pcr能够扩得到,但是连接T载体上之后总是转化不出来。
                            排除t载体连接的原因,因为平行一起转的其他片段都能长的很好。
                            我们实验室同学老师认为是由于该序列可能在大肠杆菌中转录,翻译的蛋白是对大肠杆菌有害的,不知道各位有什么见解,或者是有什么样的解决方案,谢谢!
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
加葡萄糖抑制启动子表达。
2楼2014-03-09 16:31:03
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myblin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换一种菌株试试吧!有一种菌株DB3.1可以抗一些致死基因如ccdb,你可以试试。或者用一些其他的菌株。
3楼2014-03-09 19:33:40
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
农杆菌Ag10, 生命力顽强。
4楼2014-03-09 23:21:13
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sunkai0719

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huangrui1988 at 2014-03-09 16:31:03
加葡萄糖抑制启动子表达。

具体应该有怎样的操作呢?谢谢
5楼2014-03-10 10:58:02
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duowan17

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我以前知道的一个情况,不知道对你有没有帮助。有的基因片段扩增出来之后,在片段的一段会自发的形成一个发卡结构,你要把这个结构打开,才可以连接的上。当然这只是一种可能性,你可以验证下。
6楼2014-03-10 11:14:43
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)


引用回帖:
5楼: Originally posted by sunkai0719 at 2014-03-10 10:58:02
具体应该有怎样的操作呢?谢谢...

1%的葡萄糖的LB培养基,其他抗性什么的都一样。
7楼2014-03-10 13:12:05
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sunkai0719

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by duowan17 at 2014-03-10 11:14:43
我以前知道的一个情况,不知道对你有没有帮助。有的基因片段扩增出来之后,在片段的一段会自发的形成一个发卡结构,你要把这个结构打开,才可以连接的上。当然这只是一种可能性,你可以验证下。

要把这个结构打开,使用什么样的方法呢?
8楼2014-03-11 18:29:38
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