应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 同种，不同型号的大肠杆菌P出来目的基因的可能性多大？
41/1返回列表
查看: 1156  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

嗰叽嗰叽

金虫 (小有名气)

[求助] 同种，不同型号的大肠杆菌P出来目的基因的可能性多大？ 已有1人参与

想克隆A大肠杆菌的某基因，已证实该型号A存在该基因，但是现在我想尝试从别的B型号的大肠杆菌尝试看看能不能P出目的基因，哪怕是特异性弱的，求前辈们指点下，有必要做吗？
或者求科普下相关的基本知识，小弟新手
如下是做的菌液PCR的B大肠杆菌，什么都没出现
同种，不同型号的大肠杆菌P出来目的基因的可能性多大？
2013.12.31DH5a.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
Wearehereandwearewating.
1楼 2014-01-01 19:35:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koko8001

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
嗰叽嗰叽: 金币+3, ★★★★★最佳答案 2014-01-01 21:08:33
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-02 08:34:45
我之前也做过类似的事情，一开始一直失败，后来将引物设计长一点，退火温度提高点，然后一开始的变性时间可以加长点（先煮沸10分钟，然后PCR时一开始的变性再加个好几分钟），循环次数增加到45次甚至更多，试了几次就P出来了
赞一下 回复此楼
2楼2014-01-01 19:57:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

嗰叽嗰叽

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by koko8001 at 2014-01-01 19:57:02
我之前也做过类似的事情，一开始一直失败，后来将引物设计长一点，退火温度提高点，然后一开始的变性时间可以加长点（先煮沸10分钟，然后PCR时一开始的变性再加个好几分钟），循环次数增加到45次甚至更多，试了几次 ...

请问你设计引物是多少BP？变性时间是多长呢？
赞一下 回复此楼
Wearehereandwearewating.
3楼2014-01-01 21:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koko8001

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 嗰叽嗰叽 at 2014-01-01 21:08:23
请问你设计引物是多少BP？变性时间是多长呢？...

引物长度25以上吧，30不到，TM较高了，P的时候退火温度高点，可以60出头，提高特异性，不然会P出很多猎奇的条带。
变性的话，我成功的那次，一开始的变性是6分钟还是7分钟，具体记不太清楚了，可以适当延长点。
赞一下 回复此楼
4楼2014-01-02 10:51:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 嗰叽嗰叽 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:40 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:29 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 7/350 2026-11-11 04:21 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:10 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:07 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:56 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:32 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-11 01:24 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:13 by Z7qfCsdIiD1T
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:45 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 20:07 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 15/750 2026-11-09 13:19 by Equinoxhua
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 8/400 2026-11-09 00:14 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 02:04 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭