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l刘莉娜

新虫 (小有名气)

[交流] 含sacB基因的大肠杆菌在不含Nacl 含15%蔗糖的LB上生长，不知道是什么原因？ 已有7人参与

含sacB基因的大肠杆菌在不含Nacl 含15%蔗糖的LB上生长，不知道是什么原因？


此菌株在相同条件下的液体LB（不含Nacl 含15%蔗糖）是不生长的，但是拿这个菌做感受态后铺在不含Nacl 含15%蔗糖的LB平板上菌还是生长，理论上讲是不应该有菌落的。我重复了几次结果都是一样的，请知道的虫友帮忙解释一下，非常感谢！
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1楼 2013-11-14 15:59:00
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
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做感受态时染菌了？？？？
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Thank-you，so-blue.
2楼2013-11-14 16:15:23
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l刘莉娜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by susizheng at 2013-11-14 16:15:23
做感受态时染菌了？？？？

应该没有，我重复了好几遍，我在想是不是我克隆时sacB的调控区域没有全部克隆，导致SacB的表达较弱，使菌在平板上还能生长
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3楼2013-11-14 18:28:02
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)
★
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3楼: Originally posted by l刘莉娜 at 2013-11-14 18:28:02
应该没有，我重复了好几遍，我在想是不是我克隆时sacB的调控区域没有全部克隆，导致SacB的表达较弱，使菌在平板上还能生长...

很可能克隆时sacB基因突变而表达蛋白失活
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4楼2013-11-14 21:31:15
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l刘莉娜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liygmail at 2013-11-14 21:31:15
很可能克隆时sacB基因突变而表达蛋白失活...

但是在液体LB 含10%蔗糖是不长的。我克隆的时候没有连表达载体，是用SacB自身的启动子。
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5楼2013-11-15 13:22:06
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)
★
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不知道LZ 用到哪一个sacB，有的sacB自身启动子在E.coli中是有作用的。至于你说到的情况，考虑是sacB基因的失活。液体中不长，可能是没有到你能看到的程度，平板上只要有突变，你就能看到。如果，你感受态做出来以后，蔗糖平板，长大不是很多的话，可以用，只是有点增加后续工作量。如果长满了平板，你需要再纯化你的原始菌株，取单菌落检测后再做感受态。个人见解，仅供参考。
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6楼2013-11-16 19:05:50
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l刘莉娜

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by yyy_zzz at 2013-11-16 19:05:50
不知道LZ 用到哪一个sacB，有的sacB自身启动子在E.coli中是有作用的。至于你说到的情况，考虑是sacB基因的失活。液体中不长，可能是没有到你能看到的程度，平板上只要有突变，你就能看到。如果，你感受态做出来以后 ...

谢谢，我用的SacB是从枯草里pcR出来的，但是它的上游sacR（500bp）我只p出来了一半,怀疑是不是这个原因，导致其启动较弱。
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7楼2013-11-17 09:41:53
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
7楼: Originally posted by l刘莉娜 at 2013-11-17 09:41:53
谢谢，我用的SacB是从枯草里pcR出来的，但是它的上游sacR（500bp）我只p出来了一半,怀疑是不是这个原因，导致其启动较弱。...

好象是，我隐约记得sacB之前有一个衰减子还是什么的，再之前是启动子。可能跟你扩增的太短也有关系。但是，液体不能生长平板能生长也奇怪。建议你做一个不加蔗糖的平板和加了蔗糖的平板，两者一对照，你就知道你的sacB基因到底怎么样了。
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8楼2013-11-17 18:08:05
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zdty

铁杆木虫 (小有名气)
★
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你好，我最近也在做蔗糖筛选，请问含15%蔗糖的LB里面一定要不加Nacl吗，为什么
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9楼2014-07-16 07:59:52
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jinying1123

新虫 (初入文坛)
★
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9楼: Originally posted by zdty at 2014-07-16 07:59:52
你好，我最近也在做蔗糖筛选，请问含15%蔗糖的LB里面一定要不加Nacl吗，为什么

我也有这样的疑问，为什么不能加NaCl，那在配制LB时候还是按原来的比例加yeast extract和 tryptone么？
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10楼2014-09-11 11:34:20
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