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l刘莉娜

新虫 (小有名气)

[交流] 含sacB基因的大肠杆菌在不含Nacl 含15%蔗糖的LB上生长,不知道是什么原因? 已有7人参与

含sacB基因的大肠杆菌在不含Nacl 含15%蔗糖的LB上生长,不知道是什么原因?


此菌株在相同条件下的液体LB(不含Nacl 含15%蔗糖)是不生长的,但是拿这个菌做感受态后铺在不含Nacl 含15%蔗糖的LB平板上菌还是生长,理论上讲是不应该有菌落的。我重复了几次结果都是一样的,请知道的虫友帮忙解释一下,非常感谢!
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)


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不知道LZ 用到哪一个sacB,有的sacB自身启动子在E.coli中是有作用的。至于你说到的情况,考虑是sacB基因的失活。液体中不长,可能是没有到你能看到的程度,平板上只要有突变,你就能看到。如果,你感受态做出来以后,蔗糖平板,长大不是很多的话,可以用,只是有点增加后续工作量。如果长满了平板,你需要再纯化你的原始菌株,取单菌落检测后再做感受态。个人见解,仅供参考。
6楼2013-11-16 19:05:50
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yyy_zzz

木虫 (小有名气)


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引用回帖:
7楼: Originally posted by l刘莉娜 at 2013-11-17 09:41:53
谢谢,我用的SacB是从枯草里pcR出来的,但是它的上游sacR(500bp)我只p出来了一半,怀疑是不是这个原因,导致其启动较弱。...

好象是,我隐约记得sacB之前有一个衰减子还是什么的,再之前是启动子。可能跟你扩增的太短也有关系。但是,液体不能生长平板能生长也奇怪。建议你做一个不加蔗糖的平板和加了蔗糖的平板,两者一对照,你就知道你的sacB基因到底怎么样了。
8楼2013-11-17 18:08:05
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