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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 空质粒可以转化如目的菌中，加入目的片段后怎么也转化不进去
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werty1245

新虫 (初入文坛)

[求助] 空质粒可以转化如目的菌中，加入目的片段后怎么也转化不进去已有5人参与

最近一直做电转化，空质粒可以转化入目的菌中，但是质粒双酶切连接目的片段后怎么也转化不进去。
各位大神，救救小女子吧~~~实验一直卡在这里
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1楼2014-03-03 14:46:14
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★
感谢参与，应助指数 +1
werty1245(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励交流 2014-03-03 18:35:54
本帖内容被屏蔽
2楼2014-03-03 16:14:01
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werty1245

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-03-03 16:14:01
为何不试试其他转化方式，或者装入的片段对菌株有毒性？

因为目的菌是革兰氏阳性菌，用电转化的转化效率要高一些。另外，怎么判断装入的片段是否对菌株有毒性
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3楼2014-03-04 08:53:31
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liu208xj

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
werty1245(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-05 11:46:46
1)空质粒能转入，证明这个质粒能在细胞中稳定存在；
2）可以用诱导启动子去证明毒性
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4楼2014-03-05 10:10:31
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werty1245

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by liu208xj at 2014-03-05 10:10:31
1)空质粒能转入，证明这个质粒能在细胞中稳定存在；
2）可以用诱导启动子去证明毒性

可以说明白一些不？我不明白怎么用诱导启动子证明毒性，万分感谢
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5楼2014-03-05 20:25:06
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你确保连好目的片段。你的载体连不上目的片段，转化也不出。再一个你的目的片段是否含有ccdB这类自杀基因。
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hehe
6楼2014-03-05 21:04:06
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werty1245

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-05 21:04:06
你确保连好目的片段。你的载体连不上目的片段，转化也不出。再一个你的目的片段是否含有ccdB这类自杀基因。

我确定已经连接上了，酶切、测序结果都对。目的片段里不含有自杀基因
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7楼2014-03-06 09:13:29
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是奔跑

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

不知道你现在解决这问题了吗？我现在也是卡在这电转化这里
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8楼2014-03-28 11:14:08
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liu208xj

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by werty1245 at 2014-03-05 20:25:06
可以说明白一些不？我不明白怎么用诱导启动子证明毒性，万分感谢...

你的是什么载体，是诱导型表达载体吗？还是克隆载体？
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9楼2015-08-26 08:39:18
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535390882

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

看看载体上你的目的基因有没有启动子。有的话就要看看这个启动子能不能在宿主菌里面表达。可以的话那就可能是蛋白具有毒性，这种情况下建议更换载体。
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10楼2015-08-26 11:14:08
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