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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 连接T载体的序列可能对大肠杆菌致死，一直转化不出来，有解吗？
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sunkai0719

铜虫 (初入文坛)

[求助] 连接T载体的序列可能对大肠杆菌致死，一直转化不出来，有解吗？ 已有4人参与

各位同仁大家好，我在扩一段来自病毒的一个基因，该基因pcr能够扩得到，但是连接T载体上之后总是转化不出来。
                            排除t载体连接的原因，因为平行一起转的其他片段都能长的很好。
                            我们实验室同学老师认为是由于该序列可能在大肠杆菌中转录，翻译的蛋白是对大肠杆菌有害的，不知道各位有什么见解，或者是有什么样的解决方案，谢谢！
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1楼 2014-03-09 15:21:28
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
加葡萄糖抑制启动子表达。
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2楼2014-03-09 16:31:03
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myblin

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换一种菌株试试吧！有一种菌株DB3.1可以抗一些致死基因如ccdb,你可以试试。或者用一些其他的菌株。
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3楼2014-03-09 19:33:40
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Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
农杆菌Ag10, 生命力顽强。
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4楼2014-03-09 23:21:13
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sunkai0719

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huangrui1988 at 2014-03-09 16:31:03
加葡萄糖抑制启动子表达。

具体应该有怎样的操作呢？谢谢
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5楼2014-03-10 10:58:02
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duowan17

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我以前知道的一个情况，不知道对你有没有帮助。有的基因片段扩增出来之后，在片段的一段会自发的形成一个发卡结构，你要把这个结构打开，才可以连接的上。当然这只是一种可能性，你可以验证下。
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6楼2014-03-10 11:14:43
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by sunkai0719 at 2014-03-10 10:58:02
具体应该有怎样的操作呢？谢谢...

1%的葡萄糖的LB培养基，其他抗性什么的都一样。
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7楼2014-03-10 13:12:05
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sunkai0719

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by duowan17 at 2014-03-10 11:14:43
我以前知道的一个情况，不知道对你有没有帮助。有的基因片段扩增出来之后，在片段的一段会自发的形成一个发卡结构，你要把这个结构打开，才可以连接的上。当然这只是一种可能性，你可以验证下。

要把这个结构打开，使用什么样的方法呢？
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8楼2014-03-11 18:29:38
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