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sunkai0719

铜虫 (初入文坛)

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[求助] 连接T载体的序列可能对大肠杆菌致死，一直转化不出来，有解吗？已有4人参与

各位同仁大家好，我在扩一段来自病毒的一个基因，该基因pcr能够扩得到，但是连接T载体上之后总是转化不出来。
排除t载体连接的原因，因为平行一起转的其他片段都能长的很好。
我们实验室同学老师认为是由于该序列可能在大肠杆菌中转录，翻译的蛋白是对大肠杆菌有害的，不知道各位有什么见解，或者是有什么样的解决方案，谢谢！

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1楼 2014-03-09 15:21:28

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sunkai0719

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引用回帖:

6楼: Originally posted by duowan17 at 2014-03-10 11:14:43
我以前知道的一个情况，不知道对你有没有帮助。有的基因片段扩增出来之后，在片段的一段会自发的形成一个发卡结构，你要把这个结构打开，才可以连接的上。当然这只是一种可能性，你可以验证下。

要把这个结构打开，使用什么样的方法呢？