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记忆流年jk

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接T载体转化 已有3人参与

大家好,我PCR产物纯化后,连接T载体,转化后,用抗性筛选后的板子涂菌,培养16小时左右,挑单菌落培养后,做菌液PCR验证后,初步判定为阳性,提质粒,跑电泳验证后准备测序,电泳后发现条带不是我的目的质粒的大小,条带还不止一条,是怎么回事呢,大家能帮我解释下吗?谢谢
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Longnil

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-03 23:00:52
你提取的质粒可能出现三种构像:超螺旋、线形和开环。电泳时三者的速度大小为:超螺旋>线形>开环所以你会看到不止一条带。
lifeisbeautiful
2楼2015-04-02 20:46:46
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记忆流年jk

新虫 (初入文坛)

谢谢,但是我并没有做酶切啊,还有就是这三条带一条都不是我的目的条带,遇到这种情况已经好多次了,郁闷呢

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2015-04-03 00:06:36
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ngd2013

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-04-03 23:01:26
我提质粒还没遇到过3个条带的情况。你试剂盒提质粒可能没有提好,再提一次,也有可能质粒降解,还有可能片段自连,T载体自连,同时导入细胞内了,,,,
4楼2015-04-03 09:38:49
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记忆流年jk

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ngd2013 at 2015-04-03 09:38:49
我提质粒还没遇到过3个条带的情况。你试剂盒提质粒可能没有提好,再提一次,也有可能质粒降解,还有可能片段自连,T载体自连,同时导入细胞内了,,,,

谢谢
5楼2015-04-03 22:54:20
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你提取的质粒可能出现三种构像:超螺旋、线形和开环。超螺旋也有可能不只是一种超螺旋,我曾经提出质粒发现只有5000bp,单酶切之后13Kb ,你可以试试单酶切之后质粒大小
6楼2015-04-09 11:27:35
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