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求助为什么PCR条带比目的条带大很多 已有3人参与
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| 在提取基因组后用设计的引物进行PCR，用的ExTaq酶，延伸时间是1分钟。我的目的基因为1080bp而跑出的条带比2000的MAKER也要大很多，但条带不是很亮。想知道有哪些可能得原因。 |
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18761615793
木虫 (正式写手)
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2楼2015-03-26 13:09:13
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小豆芽_won: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-27 15:41:23
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你这个问题先要搞清楚几个前提： 第一，你所设计的引物是在基因组上还是cDNA上，如果在cDNA上，用基因组为模板PCR，中间如果有个内含子，扩增的片段就会比预期的要大； 第二，你扩增出的这个片段是否测序，有可能是非特异性片段，建议引物在基因组数据库做个BLAST比对，排除非特异性扩增可能； 第三，可能是存在序列多态性，有些片段是可以移动的，比如转座子，我碰到过，中间插入一段或者缺失一段也可能导致这个现象，建议排查。 祝你好运 |
3楼2015-03-26 13:23:54
4楼2015-03-26 14:33:04
5楼2015-03-27 15:24:29
6楼2015-03-27 15:41:10
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10楼2015-03-28 21:51:26
