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小豆芽_won

银虫 (小有名气)

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[求助] 求助为什么PCR条带比目的条带大很多已有3人参与

在提取基因组后用设计的引物进行PCR，用的ExTaq酶，延伸时间是1分钟。我的目的基因为1080bp而跑出的条带比2000的MAKER也要大很多，但条带不是很亮。想知道有哪些可能得原因。

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1楼2015-03-26 11:00:35

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王平阳

金虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小豆芽_won: 金币+10, ★★★很有帮助 2015-03-27 15:41:23

你这个问题先要搞清楚几个前提：
第一，你所设计的引物是在基因组上还是cDNA上，如果在cDNA上，用基因组为模板PCR，中间如果有个内含子，扩增的片段就会比预期的要大；
第二，你扩增出的这个片段是否测序，有可能是非特异性片段，建议引物在基因组数据库做个BLAST比对，排除非特异性扩增可能；
第三，可能是存在序列多态性，有些片段是可以移动的，比如转座子，我碰到过，中间插入一段或者缺失一段也可能导致这个现象，建议排查。
祝你好运