24小时热门版块排行榜    

查看: 1911  |  回复: 2

monkey_pxs

金虫 (小有名气)

[求助] 构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,但是 已有1人参与

构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,先利用引物以重组质粒为模板通过PCR扩增却只得到小于100bp的条带;
利用酶切检测,单酶切双酶切都没有任何条带在泳道上出现。
另构建的重组质粒大小貌似大于空载体6.5kb+1.4kb目的产物,这是否也是检测失败的原因?
另构建重组质粒时,我是先酶切空载体去磷酸化再与同样去磷酸化的目的片段通过连接酶连接的,这样是否也是影响因素?

构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,但是
重组质粒酶切.png


构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,但是-1
重组质粒PCR.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是单酶切插入目的片段的,载体经去磷酸化处理,目的片段是不用进行去磷酸化处理的。修改一下方法再做实验吧。
2楼2015-03-09 11:34:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

monkey_pxs

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yesucao at 2015-03-09 11:34:54
你是单酶切插入目的片段的,载体经去磷酸化处理,目的片段是不用进行去磷酸化处理的。修改一下方法再做实验吧。

今天已经意识到这个问题了,另外由于载体上的酶切位点和目的片段上的酶切位点不同,是否需要各自都补平末端,然后载体去磷酸化处理,目的片段只补平末端不磷酸化处理再连接就可以了?
人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
3楼2015-03-09 20:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 monkey_pxs 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[考研] 售SCI文章,我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:14 by C79jjtjAKjEn
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-15 08:02 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:34 by C79jjtjAKjEn
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 6/300 2026-09-15 07:14 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:50 by 5BDX0d0WFp7t
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 06:01 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:38 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[基金申请] 求教各位大神:2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀? +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
请填处理意见