24小时热门版块排行榜    

查看: 1765  |  回复: 2

monkey_pxs

金虫 (小有名气)

[求助] 构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,但是 已有1人参与

构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,先利用引物以重组质粒为模板通过PCR扩增却只得到小于100bp的条带;
利用酶切检测,单酶切双酶切都没有任何条带在泳道上出现。
另构建的重组质粒大小貌似大于空载体6.5kb+1.4kb目的产物,这是否也是检测失败的原因?
另构建重组质粒时,我是先酶切空载体去磷酸化再与同样去磷酸化的目的片段通过连接酶连接的,这样是否也是影响因素?

构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,但是
重组质粒酶切.png


构建重组质粒后,利用酶切和PCR检测构建的重组质粒是否正确,但是-1
重组质粒PCR.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是单酶切插入目的片段的,载体经去磷酸化处理,目的片段是不用进行去磷酸化处理的。修改一下方法再做实验吧。
2楼2015-03-09 11:34:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

monkey_pxs

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yesucao at 2015-03-09 11:34:54
你是单酶切插入目的片段的,载体经去磷酸化处理,目的片段是不用进行去磷酸化处理的。修改一下方法再做实验吧。

今天已经意识到这个问题了,另外由于载体上的酶切位点和目的片段上的酶切位点不同,是否需要各自都补平末端,然后载体去磷酸化处理,目的片段只补平末端不磷酸化处理再连接就可以了?
人只有在真正做事过程中才会明白以前想的那些压抑难受什么的都是太闲了想多了的结果。
3楼2015-03-09 20:55:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 monkey_pxs 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +10 顾九笙要谦虚 2026-03-24 14/700 2026-03-26 01:09 by 15366876211
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +8 Mr. Z 2026-03-25 8/400 2026-03-25 23:00 by peike
[考研] 275求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:32 by barlinike
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315(英一)求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 311求调剂 +4 勇敢的小吴 2026-03-20 4/200 2026-03-25 18:12 by xcjcqu
[考研] 一志愿 西北大学 ,070300化学学硕,总分287,双非一本,求调剂。 +4 晨昏线与星海 2026-03-20 4/200 2026-03-25 10:16 by allen-yin
[考研] 318求调剂 +5 plum李子 2026-03-21 8/400 2026-03-25 09:26 by aa331100
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 291求调剂 +8 hhhhxn.. 2026-03-23 8/400 2026-03-23 23:15 by peike
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见