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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒酶切后条带弥散，各位给看看什么原因
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小小菲菲427

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切后条带弥散，各位给看看什么原因 已有3人参与

质粒酶切后，用sacI酶切后条带弥散成这个样子，这可能是什么问题呢，求各位懂的大仙儿给看看，这是什么原因，不胜感激。

质粒酶切后条带弥散，各位给看看什么原因
IMG_20141202_181509.jpg
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1楼 2014-12-04 08:52:08
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cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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小小菲菲427: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 16:46:25
有可能有两点：一是没有除干净蛋白质，DNA被降解。二是你摇菌的时候抗生素失效，导致杂菌过多，所有没有提出想要的质粒。
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科研炮灰
2楼2014-12-04 09:13:50
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
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小小菲菲427(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:51:33
个人觉得你的胶制的不太好，而且是不是电压大了？？因为你的marker也是有点模糊。
尽量不要太大电压。
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3楼2014-12-04 11:29:29
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喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换新电泳液，试试看

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学海无涯懂做舟
4楼2014-12-04 11:57:23
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班尼路号

新虫 (初入文坛)
★
小小菲菲427(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:51:49
我之前也切过成这样的条带，但没这么厉害。你的原因可能是酶切时间过长。我们一般是晚上酶切，放37度过夜，第二天上午就检测的。另外，感觉你的胶制得也有问题，因为Marke跑的也不清楚也没跑开。一般是1%的琼脂糖，如果片段大，可配0.8%的。
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5楼2014-12-04 16:58:59
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班尼路号

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 班尼路号 at 2014-12-04 16:58:59
我之前也切过成这样的条带，但没这么厉害。你的原因可能是酶切时间过长。我们一般是晚上酶切，放37度过夜，第二天上午就检测的。另外，感觉你的胶制得也有问题，因为Marke跑的也不清楚也没跑开。一般是1%的琼脂糖， ...

应该是0.8%的，不小心打错了
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6楼2014-12-04 17:01:54
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小小菲菲427

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 班尼路号 at 2014-12-04 16:58:59
我之前也切过成这样的条带，但没这么厉害。你的原因可能是酶切时间过长。我们一般是晚上酶切，放37度过夜，第二天上午就检测的。另外，感觉你的胶制得也有问题，因为Marke跑的也不清楚也没跑开。一般是1%的琼脂糖， ...

maker不开是因为时间不够，后来跑开的。我们酶切3小时，宝生物的酶。我跑了一下没有切的质粒，看起来很好。这位兄台，如果是提取质粒的问题，会是什么呢？比如说混入了盐，酒精没有挥发干净等等？仁兄可否给个分析呢？
质粒酶切后条带弥散，各位给看看什么原因-1
IMG_20141202_193403.jpg
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7楼2014-12-04 18:26:09
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