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小小菲菲427

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒酶切后条带弥散,各位给看看什么原因 已有3人参与

质粒酶切后,用sacI酶切后条带弥散成这个样子,这可能是什么问题呢,求各位懂的大仙儿给看看,这是什么原因,不胜感激。

质粒酶切后条带弥散,各位给看看什么原因
IMG_20141202_181509.jpg
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cckk_2000

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小小菲菲427: 金币+1, ★有帮助 2014-12-04 16:46:25
有可能有两点:一是没有除干净蛋白质,DNA被降解。二是你摇菌的时候抗生素失效,导致杂菌过多,所有没有提出想要的质粒。
科研炮灰
2楼2014-12-04 09:13:50
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
小小菲菲427(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:51:33
个人觉得你的胶制的不太好,而且是不是电压大了??因为你的marker也是有点模糊。
尽量不要太大电压。
3楼2014-12-04 11:29:29
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喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换新电泳液,试试看

[ 发自小木虫客户端 ]
学海无涯懂做舟
4楼2014-12-04 11:57:23
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班尼路号

新虫 (初入文坛)

★
小小菲菲427(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-04 19:51:49
我之前也切过成这样的条带,但没这么厉害。你的原因可能是酶切时间过长。我们一般是晚上酶切,放37度过夜,第二天上午就检测的。另外,感觉你的胶制得也有问题,因为Marke跑的也不清楚也没跑开。一般是1%的琼脂糖,如果片段大,可配0.8%的。
5楼2014-12-04 16:58:59
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班尼路号

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 班尼路号 at 2014-12-04 16:58:59
我之前也切过成这样的条带,但没这么厉害。你的原因可能是酶切时间过长。我们一般是晚上酶切,放37度过夜,第二天上午就检测的。另外,感觉你的胶制得也有问题,因为Marke跑的也不清楚也没跑开。一般是1%的琼脂糖, ...

应该是0.8%的,不小心打错了
6楼2014-12-04 17:01:54
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小小菲菲427

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 班尼路号 at 2014-12-04 16:58:59
我之前也切过成这样的条带,但没这么厉害。你的原因可能是酶切时间过长。我们一般是晚上酶切,放37度过夜,第二天上午就检测的。另外,感觉你的胶制得也有问题,因为Marke跑的也不清楚也没跑开。一般是1%的琼脂糖, ...

maker不开是因为时间不够,后来跑开的。我们酶切3小时,宝生物的酶。我跑了一下没有切的质粒,看起来很好。这位兄台,如果是提取质粒的问题,会是什么呢?比如说混入了盐,酒精没有挥发干净等等?仁兄可否给个分析呢?
质粒酶切后条带弥散,各位给看看什么原因-1
IMG_20141202_193403.jpg

7楼2014-12-04 18:26:09
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