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dhtgyhjj1986

新虫 (小有名气)

[求助] 空白对照中主峰位置干扰问题已有8人参与

本人现在做一种新药的有关物方法摸索。遇到问题是,走空针和空白时在主峰位置有干扰峰,且面积恒定(50左右),进样后空白干扰峰面积不增大,DAD检测吸收曲线与终产物一致。
走等度时,峰高降低至200左右,空白无干扰峰出现。
目前已经洗过针,换过柱子和仪器,都没有效果。
请教各位高手指点一二。
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前事不忘后事之师
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xuewujx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by dhtgyhjj1986 at 2014-12-03 14:19:27
进过,第一针空白峰面积115,第二针第三针及之后的空白干扰峰面积就会恒定在59左右,不会逐渐降低,似乎不太符合残留的规律。所以正在苦恼。...

应该是流动相的问题,你可以试试柱子在低梯度平衡不同的时间看看,干扰峰应该会随着平衡时间的加长而增大。
22楼2014-12-05 11:54:53
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lia

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dhtgyhjj1986: 金币+2, 有帮助, 谢谢,流动相是水,乙腈,甲醇,三氟乙酸,没有盐啊。 2014-12-03 13:03:26
我们有一次做的磷酸盐,进空针也是主峰处有干扰,后来将磷酸盐浓度降低就没有干扰了。
4楼2014-12-03 09:43:07
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by dhtgyhjj1986 at 2014-12-03 14:19:27
进过,第一针空白峰面积115,第二针第三针及之后的空白干扰峰面积就会恒定在59左右,不会逐渐降低,似乎不太符合残留的规律。所以正在苦恼。...

走过0μl进样的没有?可以看看是进样系统的残留还是色谱柱的残留 Agilent的系统如果流动相与进样溶剂差别太大,进样系统容易残留
归零
10楼2014-12-03 15:43:32
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by dhtgyhjj1986 at 2014-12-03 16:53:07
0μl进样是走空针吗?走空针也有干扰峰,面积和走空白一致。流动相和溶剂组成一致,但比例不同。样品在溶剂中更易于溶解,但在流动相(水相or初始比例)中也可以溶解。流动相溶解时干扰峰会降低,由于流动相不能溶 ...

空针和0μl是一样的。从你的情况来看应该和色谱柱以及仪器没有关系,而流动相溶解能力小,干扰峰会降低,我想知道是不是流动相作为空白时干扰峰降低,如果是,可能需要怀疑进样瓶或者配制样品的器具污染,可以换新的或者重新清洗(例如用铬酸或者醇碱清洗)后再次进样试试。
归零
13楼2014-12-03 18:46:41
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archbishop

禁虫 (职业作家)

优秀版主

可能要换进样器的六通阀

[ 发自小木虫客户端 ]
雲幕低垂映桂子,江月留白問柳心。
14楼2014-12-03 18:57:33
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chengchris

木虫 (正式写手)

微信chengweichris

应该是流动相的问题,走梯度时流动相变化不宜过快

[ 发自小木虫客户端 ]
一定要努力
15楼2014-12-03 19:32:53
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zuoan1yue

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
意思应该是在做梯度时有固定的空白或空针进样的影响,等度的时候没有杂峰影响?
可不可以试一下在要出目标峰的时候设置成等度一段时间,再进行梯度,类似阶梯状。
23楼2014-12-05 12:49:54
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星星哥哥

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
调整流动相比例或梯度程序
心事浩茫连广宇,于无声处听惊雷.
24楼2014-12-05 13:17:49
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dhtgyhjj1986

新虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by klicking at 2014-12-04 15:47:03
我也无能为力啦,只有你自己多试试了,如果用的是Agilent的仪器,建议换换Waters的或者岛津戴安的试试看,还有进样浓度不要太高,我们有一个项目,因为进样浓度太高,在每台仪器上都有残留。如果解决了,可以共享一 ...

残留问题目前已经解决。原因是流动相过滤时滤膜上的杂质污染,当然所用的三氟乙酸(阿拉丁的)纯度不够也有一些关系。之前,流动相水相和有机相是采用的两种膜分别过滤,后来换成一种膜先后过滤就没事儿了。非常感谢大家的积极建议,希望能对各位虫友有些启示。
前事不忘后事之师
27楼2014-12-12 11:38:50
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普通回帖

trsdfae

新虫 (小有名气)


那么小,果断是梯度问题吧
2楼2014-12-03 08:36:24
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星海慧儿

荣誉版主 (职业作家)

木虫精灵

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhtgyhjj1986: 金币+10, 有帮助, 是的,走自己的梯度有干扰,走等度没有。好的,我试一试。 2014-12-03 13:02:09
被你的描述搞糊涂了,你开始说的干扰是走你选定的梯度方法吧,根据你后来的等度方法来看应该不是残留,可能是梯度导致的溶剂干扰,你试试调整流动相比例或梯度程序,如果你的供试品不是流动相溶解的建议也更换成流动相。
我是超级天后:天天努力,不落人后!
3楼2014-12-03 08:39:25
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voyager88

金虫 (著名写手)

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★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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dhtgyhjj1986: 金币+10, ★★★很有帮助, 针洗过了,柱头和样品污染如何排除,请大侠指教. 2014-12-03 13:05:02
应该是残留,不然DAD的光谱曲线怎么会跟样品一致?你想想,保留时间一致,紫外光谱一致,怎么会是其它的东西呢?最多也只会是同分异构体而已,溶剂一般是没有紫外吸收的,所以梯度峰的的紫外光谱曲线肯定与一般的色谱峰不同。这个残留可能是针、柱头、样品污染等等,一一去排除一下
微信公众号:Pharmaguider(药事纵横),主页:www.pharmaguider.cn
5楼2014-12-03 10:42:43
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dhtgyhjj1986

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by trsdfae at 2014-12-03 08:36:24
那么小,果断是梯度问题吧

这个干扰峰最小时峰面积5左右,现在是60左右,最大150,不知梯度峰面积会不会这样。
前事不忘后事之师
6楼2014-12-03 13:00:36
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klicking

至尊木虫 (著名写手)

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★ ★ ★ ★ ★
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dhtgyhjj1986: 金币+5, 有帮助 2014-12-03 14:19:43
连续进过空白没有?如果是残留 连续进空白之后峰面积会逐渐降低
归零
7楼2014-12-03 13:14:49
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dhtgyhjj1986

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by klicking at 2014-12-03 13:14:49
连续进过空白没有?如果是残留 连续进空白之后峰面积会逐渐降低

进过,第一针空白峰面积115,第二针第三针及之后的空白干扰峰面积就会恒定在59左右,不会逐渐降低,似乎不太符合残留的规律。所以正在苦恼。
前事不忘后事之师
8楼2014-12-03 14:19:27
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dhtgyhjj1986

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by klicking at 2014-12-03 13:14:49
连续进过空白没有?如果是残留 连续进空白之后峰面积会逐渐降低

补充一下,走过样品之后再走空白(2针),此干扰峰面积不会增大,还是59左右,也不太符合残留的规律。
前事不忘后事之师
9楼2014-12-03 14:23:47
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