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alcyonezhang

铜虫 (小有名气)

[求助] 梯度空白杂峰什么原因 已有7人参与

大家好,新手,最近做个液相方法,流动相a为 水:TFA=100:0.5,流动相b  ACN:水=90:10 用TFA调节pH与a相同
时间程序     时间(min)    b相(%)
                     0                       10
                     4                       60
                     12                     60
                     15                     90
                     25                     90
                     28                     10
                     35                    stop      
图谱见附件

前面有个两个倒峰,后面有机相浓度上去后出很多杂峰,这样做最终方法肯定是不行的吧,如何解决呢?
流动相每天用之前都过滤脱气了

梯度空白杂峰什么原因
空白.jpg
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
4楼: Originally posted by alcyonezhang at 2014-08-22 09:07:30
方法不确定,是新方法开发,TFA比例过高会有什么影响呢?...

三氟乙酸酸性很强,加太多的话流动相pH很低,对色谱柱有伤害,一般情况最多加0.1%
铁甲依然在
7楼2014-08-22 09:14:18
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赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

另,先多冲洗几针空白看看杂峰有没有变化,如果是色谱柱和系统中的残留的话可以冲洗掉的
铁甲依然在
8楼2014-08-22 09:15:12
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kf1009

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
TFA太高了,降低到0.1%试试,TFA本身吸收在低波长有吸收,你的检测波长是多少,如果在其他波长有吸收,就不要选低波长。梯度跨度也很大,确定起始有没有必要那么低?最终要不要那么高?色谱系统和柱子也可以考虑清洗一下,排除干扰。
快乐不需要走遍天涯去寻找,只需播一粒种子在脚下。
9楼2014-08-22 09:22:49
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普通回帖

赈早见琥珀主

木虫 (正式写手)

总感觉你这个流动相中TFA比例过高~~~方法确定没问题么?
铁甲依然在
2楼2014-08-21 16:21:01
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xxaijwd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
2.5Min前的峰感觉像溶剂峰,后面怎么觉得是你柱子不干净呢……30min基线忽然下来了是换梯度造成的,这些应该没什么影响,但是其他明显出峰的位置你好好排查下原因吧,我总觉得是系统或色谱柱不干净造成的……
3楼2014-08-21 19:30:17
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alcyonezhang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 赈早见琥珀主 at 2014-08-21 16:21:01
总感觉你这个流动相中TFA比例过高~~~方法确定没问题么?

方法不确定,是新方法开发,TFA比例过高会有什么影响呢?
4楼2014-08-22 09:07:30
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alcyonezhang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xxaijwd at 2014-08-21 19:30:17
2.5Min前的峰感觉像溶剂峰,后面怎么觉得是你柱子不干净呢……30min基线忽然下来了是换梯度造成的,这些应该没什么影响,但是其他明显出峰的位置你好好排查下原因吧,我总觉得是系统或色谱柱不干净造成的……

我也是觉得色谱柱或者系统不干净,用有机相冲洗后还是这样
5楼2014-08-22 09:09:46
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daisyzhangwei

木虫 (职业作家)

不曾来过……

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
梯度变化容易造成这种情况,另外,就是系统或者色谱柱不是太干净,有些脏了。
建议你流动相两相里面都加相同的TFA,以保持整个流动相在梯度变化的时候pH是稳定的。像你这种情况,柱子会很容易损坏
人生若只如初见...
6楼2014-08-22 09:12:19
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alcyonezhang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by daisyzhangwei at 2014-08-22 09:12:19
梯度变化容易造成这种情况,另外,就是系统或者色谱柱不是太干净,有些脏了。
建议你流动相两相里面都加相同的TFA,以保持整个流动相在梯度变化的时候pH是稳定的。像你这种情况,柱子会很容易损坏

加相同的TFA的话ph相差很大的,一个是水,一个是乙腈啊,现在我两相ph基本都在2.3左右
10楼2014-08-22 09:27:41
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