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153863147

金虫 (小有名气)

[求助] HPLC做梯度洗脱中基线有杂峰

我在做间苯三酚中未知物质的测试,用的是C18柱,流动相为乙腈:0.1%的磷酸缓冲盐。梯度为:0-9min(乙腈0%),9-15min(乙腈50%),15-25min(乙腈80%),25-30min(乙腈80%),由于还没有买到标准品,就只测了一下样品溶液,有好多连续不断的峰,单独进了溶剂和空白都有类似的杂峰出现。换了柱子和另外一台液相色谱仪之后还是会出现杂峰。柱子也都冲洗过了。请问下哪位知道有哪些原因造成这种情况。
附图1为,样品间苯三酚的色谱峰
图2为,单独进空白的色谱峰
HPLC做梯度洗脱中基线有杂峰
图1.jpg


HPLC做梯度洗脱中基线有杂峰-1
图2.jpg
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读研虐心啊!
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
153863147: 金币+1, ★有帮助, 图2 就是走空针的图谱啊,磷酸盐浓度很低,应该不要紧 2013-09-06 16:25:54
楼主走空针试试 感觉是梯度峰  这个估计没法避免 还有 0-9min(乙腈0%) 这个很伤柱子哈
2楼2013-09-06 15:03:29
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153863147

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lifucheng at 2013-09-06 15:03:29
楼主走空针试试 感觉是梯度峰  这个估计没法避免 还有 0-9min(乙腈0%) 这个很伤柱子哈

图2就是走空针的图谱啊,磷酸盐浓度很低,应该不要紧
读研虐心啊!
3楼2013-09-06 16:24:44
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e_liang369

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
梯度的话对你流动相的要求比较高,乙腈和水的质量不行的话,也就相当于乙腈和水把杂质带进色谱柱。不知道你有机溶剂、盐和水用的是哪个牌子的?
悲催的研发!
4楼2013-09-06 16:37:22
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153863147

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by e_liang369 at 2013-09-06 16:37:22
梯度的话对你流动相的要求比较高,乙腈和水的质量不行的话,也就相当于乙腈和水把杂质带进色谱柱。不知道你有机溶剂、盐和水用的是哪个牌子的?

应该没问题吧,一直做等度的时候都是好好的,乙腈是色谱纯,磷酸二氢钾的厂家是上海,水是娃哈哈,都是滤膜过滤和超声过的。
读研虐心啊!
5楼2013-09-06 16:46:23
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
153863147: 金币+2, ★有帮助, 怎么换合适啊,能否给个建议? 2013-09-09 08:59:34
从图2来看应该是梯度峰了,楼主估计换梯度试试

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2013-09-07 09:23:55
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zds316

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
153863147: 金币+2, ★有帮助 2013-09-09 09:02:20
你前面走了9分钟,是没有乙腈的,里面可能有些杂质是保留在柱子上,等你有乙腈的时候会一下子冲出来的。你的流动相换个牌子试试。
http://emuch.net/bbs/viewthread.php?tid=3133586
7楼2013-09-07 11:04:26
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q23ef

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
153863147: 金币+4, ★★★很有帮助, 这是个保护柱吗?我们的液相和柱子都是安捷伦的,能否配用?还有不知道这个多少钱,我好申请一下? 2013-09-09 09:02:06
梯度干扰问题很常见,我的惨痛经历就不说了,直接告诉你解决办法吧:买一个岛津的GHOST trap DS,污染物捕集器,或曰“神器”,其装填活性炭,吸附仪器系统中极难完全去除的有紫外吸收的物质。

参考 http://www.shimadzu.com/an/hplc/ghost-trap-ds.html,此货属于耗材,梯度必备,价钱自查,尚未见其他公司有类似产品。

你的空白峰有20mAU左右,基本不要指望通过使用高等级试剂、milliQ水、换柱子、换梯度、换仪器、清洗仪器之类的方法能除掉。
8楼2013-09-07 19:12:52
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153863147

金虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lifucheng at 2013-09-07 09:23:55
从图2来看应该是梯度峰了,楼主估计换梯度试试

怎么换合适啊,能否给个建议?
读研虐心啊!
9楼2013-09-09 08:59:09
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153863147

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by q23ef at 2013-09-07 19:12:52
梯度干扰问题很常见,我的惨痛经历就不说了,直接告诉你解决办法吧:买一个岛津的GHOST trap DS,污染物捕集器,或曰“神器”,其装填活性炭,吸附仪器系统中极难完全去除的有紫外吸收的物质。

参考 http://www. ...

这是个保护柱吗?我们的液相和柱子都是安捷伦的,能否配用?还有不知道这个多少钱,我好申请一下?
读研虐心啊!
10楼2013-09-09 09:01:49
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