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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 酶切质粒是否可以不跑胶，直接纯化？
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handsomejjs

银虫 (初入文坛)

[求助] 酶切质粒是否可以不跑胶，直接纯化？ 已有8人参与

提出的质粒经常酶切不彻底，跑胶出现线形和环形两条带。

我的问题是，直接纯化，环形质粒是否会被线形过滤柱洗脱? 如果环形能被柱子分离，是否就可以直接纯化，不用跑胶了？

非常感谢！
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1楼 2014-11-30 05:01:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cckk_2000

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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handsomejjs(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-30 15:47:51
handsomejjs: 金币+1 2014-12-09 05:30:32
handsomejjs: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-09 05:30:40
纯化去除的是盐和酶之类的，DNA去除不了，跑胶就是为了分离未切和切开的，但是其实切不开有一个更好的解决办法，减少质粒的量，增加酶切时间。
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科研炮灰
6楼2014-11-30 15:06:33
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sandancy123

捐助贵宾 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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handsomejjs(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-30 15:48:00
handsomejjs: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-09 05:30:46
如果你要回收的载体片段用做连接体系的话，不跑胶不行，不管你是单酶切还是双酶切，这样会降低你的连接效率，如果酶切的是pcr片段就可以直接不跑胶回收

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7楼2014-11-30 15:40:06
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稻稻

铜虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-01 12:27:30
handsomejjs: 金币+1 2014-12-09 05:30:51
个人觉得酶切不彻底关系也不大，只要电泳能把条带区分开，把符合目的片段大小的条带切下来回收就可以啦。

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做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
8楼2014-11-30 15:57:34
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喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-30 15:47:18
我这两天也在纠结这个问题中，以前做三个酶同时切都没出现跑胶拖尾的，这两天单酶切质粒跑胶几次都是酶切不完全或拖尾严重，好郁闷呀。今天又得重做了，朋友知道好建议了也和我分享一下哦

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学海无涯懂做舟
2楼2014-11-30 07:00:06
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

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handsomejjs: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-09 05:30:05
酶切质粒必须切胶回收，否则后面都是空质粒。

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3楼2014-11-30 07:16:34
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xzy0425

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-30 15:47:35
handsomejjs: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-09 05:30:14
如果是单酶切，适当延长酶切时间，带充分酶切后，可以直接进行过柱回收；非单酶切，如果酶切位点很近也可以，否则不可以，只能进行切胶回收。
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4楼2014-11-30 10:46:15
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-30 15:47:43
handsomejjs: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-09 05:30:21
少切点质粒就行了，然后直接过柱回收

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5楼2014-11-30 10:59:22
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-30 23:04:44
handsomejjs: 金币+1, ★★★很有帮助 2014-12-09 05:30:57
建议酶切时间延长，酶切彻底，以前酶切2h还有没有切好的，现在酶切过夜，基本上都酶切彻底
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踏实
9楼2014-11-30 21:59:53
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喜气洋洋

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-12-01 12:27:37
今天验证了一下，单酶切，2.5h后，跑电泳与未酶切的环状DNA对比，的确线性比环状跑得慢一些，多跑一会儿完全可以分开

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学海无涯懂做舟
10楼2014-11-30 23:28:16
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