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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR溶解曲线的峰不单一，求大神看一下！
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修香恋

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR溶解曲线的峰不单一，求大神看一下！ 已有5人参与

做荧光定量PCR时，溶解曲线的图像是这个样子，请大神帮忙分析下原因，感激不尽！

荧光定量PCR溶解曲线的峰不单一，求大神看一下！
123.jpg
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1楼 2014-11-19 17:09:50
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 19:25:02
存在引物二聚体：提示引物浓度偏高，降低浓度即可
有非特异扩增：建议跑胶确认一下
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2楼2014-11-19 17:22:12
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修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-11-19 17:22:12
存在引物二聚体：提示引物浓度偏高，降低浓度即可
有非特异扩增：建议跑胶确认一下

但是同一个引物，前几次扩增没出现这种情况。会不会是cDNA的问题？
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3楼2014-11-19 17:23:54
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 修香恋 at 2014-11-19 17:23:54
但是同一个引物，前几次扩增没出现这种情况。会不会是cDNA的问题？...

cDNA、引物与上次的浓度一致吗？
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4楼2014-11-19 17:27:13
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修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-11-19 17:27:13
cDNA、引物与上次的浓度一致吗？...

cDNA不一样，是重新提的RNA，但是引物浓度都是一样的，引物一样
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5楼2014-11-19 19:11:01
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
修香恋(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-20 18:39:31
修香恋: 金币+13, ★★★很有帮助, 谢谢啦 2015-03-10 11:07:33
有杂带，片段小。可能是mRNA的差异剪接产物吧。
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6楼2014-11-20 11:14:30
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
修香恋(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-20 18:39:43
是不是引物的特异性不是很好
我一般都是设计几对 挑最好的用
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7楼2014-11-20 13:42:19
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修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-11-20 11:14:30
有杂带，片段小。可能是mRNA的差异剪接产物吧。

意思是我的样品的问题吗？
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8楼2014-11-20 16:16:18
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修香恋

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by happydove at 2014-11-20 13:42:19
是不是引物的特异性不是很好
我一般都是设计几对 挑最好的用

这对引物我做过好几次，前几次都没问题，就这次是这个样子。不知道会不会是cDNA的影响？
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9楼2014-11-20 16:16:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 修香恋 at 2014-11-20 16:16:18
意思是我的样品的问题吗？...

嗯
10楼2014-11-20 17:07:44
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