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修香恋

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR溶解曲线的峰不单一,求大神看一下! 已有5人参与

做荧光定量PCR时,溶解曲线的图像是这个样子,请大神帮忙分析下原因,感激不尽!

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123.jpg
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
修香恋(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-20 18:39:43
是不是引物的特异性不是很好
我一般都是设计几对 挑最好的用
7楼2014-11-20 13:42:19
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 19:25:02
存在引物二聚体:提示引物浓度偏高,降低浓度即可
有非特异扩增:建议跑胶确认一下
2楼2014-11-19 17:22:12
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-11-19 17:22:12
存在引物二聚体:提示引物浓度偏高,降低浓度即可
有非特异扩增:建议跑胶确认一下

但是同一个引物,前几次扩增没出现这种情况。会不会是cDNA的问题?
3楼2014-11-19 17:23:54
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 修香恋 at 2014-11-19 17:23:54
但是同一个引物,前几次扩增没出现这种情况。会不会是cDNA的问题?...

cDNA、引物与上次的浓度一致吗?
4楼2014-11-19 17:27:13
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