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yajune木虫 (职业作家)
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[求助]
荧光定量PCR标准曲线的问题 已有2人参与
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投了篇毒理学的文章，审稿人提出了关于荧光定量PCR的优化问题，我的QPCR就是按照试剂盒进行的，就是所有测的基因都按照一个扩增方法（试剂盒推荐的）就都能扩出来，所以可能也不需要优化吧。但是关于标准曲线的问题，我有点不明白，我的QPCR做的是相对定量，也就是把对照组当作1，然后计算处理组的相对表达值；这种半定量也需要标准曲线么？还是说审稿人指的是扩增曲线呢？下边是审稿人的原话，麻烦比较懂得同学帮我分析一下，谢谢啦 How were the QPCR assays optimised: no details are currently given and the authors state everything was run at the same temperature. What was the efficiency and correlation coefficient for the standard curves in each case? If appropriate validation was not conducted the dataset is not valid. If this was conducted, please add details to the supplemental table. 另外审稿人还提了一个选择内参基因的问题，我用的是beta-actin，但是审稿人貌似觉得这个内参不合适。。。问我是如何证明它的表达是稳定的，这个问题我还真没考虑过，因为我是看大部分文献都以beta-actin为内参，我就理所当然的用了这个，请问一下这个问题从技术上讲有比较好的解决办法么？或者说有什么比较好的回答方法么？ |
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