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下雨没有伞银虫 (小有名气)
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交流一下荧光定量溶解曲线的问题 已有4人参与
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溶解曲线怎么有一个向下的峰呀，若是引物二聚体，峰应该是向上的呀，各位童鞋有没有遇到这样的情况过，怎么去调整一下呢（换了个网可以上图了）在70度的地方有一个向下的小峰，不能理解 106.png  105.png [ Last edited by 下雨没有伞 on 2014-3-4 at 22:50 ] |
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 分子生化实验经验积累 | QPCR 问题简答 |
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gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 14:33:32
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问题已解决，还是感谢大家一起的交流。 今天调整了一下条件就好了，全平了。 心情很好呀，哈哈。  和大家分享一下我的思路： 所有稀释样本的溶解曲线都有那个小峰-----那么体系的问题可能不大 有个向下的峰-------那么如果是向上的峰呢-------在这个位置上如果是向上的峰有可能是引物二聚体也有可能是非特异性扩增-------那么不管是什么峰是怎么形成的呢如果是向上的峰那么是荧光信号增强所形成-------那么向下的峰则可能是荧光信号减弱所形成--------为什么会减弱呢温度太高没有结合完全------向上的峰是增加退火温度来减少特异性的-------那么向下的峰呢，所以我就降低了退火温度 果然和我分析的一样呀，今天又做了一次，全平了没有那个向下的峰了 向所有做实验遇到瓶颈的童鞋们致敬，遇到困难了放一放，想一想，聊一聊。 愿大家的实验都顺利  |
8楼2014-03-06 16:13:59
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