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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教荧光定量软件溶解曲线smooth功能的问题
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wwling

铜虫 (小有名气)

[求助] 请教荧光定量软件溶解曲线smooth功能的问题

用的是伯乐的机子，软件是Opticon Monitor,其中溶解曲线有一项为Smooth。做定量不调Smooth时，溶解曲线前面有许多小峰，稍微调一下就变平滑的单峰了。不知道这个smooth调整过后的结果可用吗？另外那些杂峰是什么呢？电泳产物结果是单一的条带，觉得不像非特异条带吧，如何消除呢？求解啊！~~~~~
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1楼 2011-05-13 20:50:43
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adslye

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

wwling(金币+1): 谢谢哦 嘿嘿 2011-05-14 19:38:55
1.是不是非特异性产物：上荧光图，凝胶图没用。~~~
2.每一家定量PCR的数据收集后都是经过数学处理的,smooth后自然可以用。
   不过没有文章会看你的这个原始峰。
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2楼2011-05-14 12:15:54
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wwling

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2011-05-14 12:15:54:
1.是不是非特异性产物：上荧光图，凝胶图没用。~~~
2.每一家定量PCR的数据收集后都是经过数学处理的,smooth后自然可以用。
   不过没有文章会看你的这个原始峰。

没调和调整过的溶解曲线
不知道为什么这个多杂峰呢 是不是都是非特异带？
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3楼2011-05-14 13:54:35
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adslye

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wwling at 2011-05-14 13:54:35:
没调和调整过的溶解曲线
不知道为什么这个多杂峰呢 是不是都是非特异带？

我看了你的图，没问题的。
因为看原始曲线，是一条有正常荧光信号降低的溶解曲线，但就是线上有些凹凸。好比一条不平的路。然而，将这个原始数据取对数后，这些小的数据浮动会产生较大的峰。这是数学换算造成的。不是说你的产物有那么多峰。

只能说伯乐的机子直接将原始荧光信号采集而未做过多加工就上图了。。。。
其实你能想到，每个温度下都是一个双链的降解和合成的平衡。既有解链又有结合。
这就可能造成少量的双链产物数量的起伏。用SYBR GREEN就和直接的反映了这个
现象而造成不平的曲线。用TEq MAN应该会好些。
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4楼2011-05-15 10:40:06
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wwling

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by adslye at 2011-05-15 10:40:06:
我看了你的图，没问题的。
因为看原始曲线，是一条有正常荧光信号降低的溶解曲线，但就是线上有些凹凸。好比一条不平的路。然而，将这个原始数据取对数后，这些小的数据浮动会产生较大的峰。这是数学换算造成 ...

谢谢指点啊~~受益了
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5楼2011-05-15 13:08:24
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