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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 交流一下荧光定量溶解曲线的问题
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下雨没有伞

银虫 (小有名气)

[求助] 交流一下荧光定量溶解曲线的问题已有4人参与

溶解曲线怎么有一个向下的峰呀，若是引物二聚体，峰应该是向上的呀，各位童鞋有没有遇到这样的情况过，怎么去调整一下呢（换了个网可以上图了）在70度的地方有一个向下的小峰，不能理解
交流一下荧光定量溶解曲线的问题
106.png


交流一下荧光定量溶解曲线的问题-1
105.png

[ Last edited by 下雨没有伞 on 2014-3-4 at 22:50 ]
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只有向往美好的生活，才能过上美好的生活
1楼2014-03-04 20:52:49
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回帖置顶 ( 共有1个 )

下雨没有伞

银虫 (小有名气)
gyesang: 回帖置顶 2014-03-31 14:33:32
问题已解决，还是感谢大家一起的交流。
今天调整了一下条件就好了，全平了。　心情很好呀，哈哈。　

和大家分享一下我的思路：
所有稀释样本的溶解曲线都有那个小峰-----那么体系的问题可能不大
有个向下的峰-------那么如果是向上的峰呢-------在这个位置上如果是向上的峰有可能是引物二聚体也有可能是非特异性扩增-------那么不管是什么峰是怎么形成的呢如果是向上的峰那么是荧光信号增强所形成-------那么向下的峰则可能是荧光信号减弱所形成--------为什么会减弱呢温度太高没有结合完全------向上的峰是增加退火温度来减少特异性的-------那么向下的峰呢，所以我就降低了退火温度
果然和我分析的一样呀，今天又做了一次，全平了没有那个向下的峰了

向所有做实验遇到瓶颈的童鞋们致敬，遇到困难了放一放，想一想，聊一聊。
愿大家的实验都顺利
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只有向往美好的生活，才能过上美好的生活
8楼2014-03-06 16:13:59
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下雨没有伞

银虫 (小有名气)
再上个扩增曲线的图
交流一下荧光定量溶解曲线的问题-2
Amplification Plot +6.jpg


交流一下荧光定量溶解曲线的问题-3
Amplification Plot ABL2.jpg



[ Last edited by 下雨没有伞 on 2014-3-4 at 22:52 ]
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只有向往美好的生活，才能过上美好的生活
2楼2014-03-04 20:57:03
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下雨没有伞

银虫 (小有名气)
有没有人看看呀
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只有向往美好的生活，才能过上美好的生活
3楼2014-03-05 20:02:14
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ifyousee

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，你拿出这么漂亮的定量结果图出来是让我们羡慕嫉妒恨的么~
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4楼2014-03-06 00:15:24
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 14:32:51
.................
    感觉做同一样品的梯度稀释
    没见过向下的，但认为没有问题，你觉得不爽，大可拿产物跑胶来看看结果，是单一条带就没有任何问题。
赞一下(1人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
5楼2014-03-06 06:32:45
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jiaolong11a

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
标注曲线没问题的话就应该没问题
赞一下 回复此楼
多情总被无情扰。。。愁
6楼2014-03-06 08:34:57
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07bio

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没看出任何问题，结果页很好啊
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7楼2014-03-06 10:06:46
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下雨没有伞

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by atlanticwi at 2014-03-06 06:32:45
.................
    感觉做同一样品的梯度稀释
    没见过向下的，但认为没有问题，你觉得不爽，大可拿产物跑胶来看看结果，是单一条带就没有任何问题。

是个梯度稀释，对溶解曲线的问题本也是做了两个方案，一个是降低退火温度，一个是产物跑胶。降低退火温度做了问题已解决了，下面就没有跑胶了。
感谢交流
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只有向往美好的生活，才能过上美好的生活
9楼2014-03-06 16:21:31
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