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修香恋

铜虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR溶解曲线的峰不单一,求大神看一下! 已有5人参与

做荧光定量PCR时,溶解曲线的图像是这个样子,请大神帮忙分析下原因,感激不尽!

荧光定量PCR溶解曲线的峰不单一,求大神看一下!
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 19:25:02
存在引物二聚体:提示引物浓度偏高,降低浓度即可
有非特异扩增:建议跑胶确认一下
2楼2014-11-19 17:22:12
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-11-19 17:22:12
存在引物二聚体:提示引物浓度偏高,降低浓度即可
有非特异扩增:建议跑胶确认一下

但是同一个引物,前几次扩增没出现这种情况。会不会是cDNA的问题?
3楼2014-11-19 17:23:54
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 修香恋 at 2014-11-19 17:23:54
但是同一个引物,前几次扩增没出现这种情况。会不会是cDNA的问题?...

cDNA、引物与上次的浓度一致吗?
4楼2014-11-19 17:27:13
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-11-19 17:27:13
cDNA、引物与上次的浓度一致吗?...

cDNA不一样,是重新提的RNA,但是引物浓度都是一样的,引物一样
5楼2014-11-19 19:11:01
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
修香恋(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-20 18:39:31
修香恋: 金币+13, ★★★很有帮助, 谢谢啦 2015-03-10 11:07:33
有杂带,片段小。可能是mRNA的差异剪接产物吧。
6楼2014-11-20 11:14:30
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
修香恋(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-20 18:39:43
是不是引物的特异性不是很好
我一般都是设计几对 挑最好的用
7楼2014-11-20 13:42:19
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jurkat.1640 at 2014-11-20 11:14:30
有杂带,片段小。可能是mRNA的差异剪接产物吧。

意思是我的样品的问题吗?
8楼2014-11-20 16:16:18
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修香恋

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by happydove at 2014-11-20 13:42:19
是不是引物的特异性不是很好
我一般都是设计几对 挑最好的用

这对引物我做过好几次,前几次都没问题,就这次是这个样子。不知道会不会是cDNA的影响?
9楼2014-11-20 16:16:59
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 修香恋 at 2014-11-20 16:16:18
意思是我的样品的问题吗?...

10楼2014-11-20 17:07:44
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