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单酶切后出现两条距离很近的条带 已有2人参与
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| 我最近用BamHI单酶切我的载体，跑检测胶发现切开了，只有一条带，胶回收时发现有两条距离很近的带，且靠近点样孔的带偏暗。酶切时间37℃，40min.这是怎么么回事？是没有且彻底？ |
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zshw_001
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3楼2014-11-19 16:48:30
youlinglyw
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
sallyquan(myprayer代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 12:18:45
感谢参与，应助指数 +1
sallyquan(myprayer代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 12:18:45
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可能原因如下，按照可能性依次下降排序： 1你的载体没有酶切完全，所以造成了你的电泳有两条带，一条是环形的载体，一条是线性的载体 2你的载体上存在不止一个BamHI位点，这个可能性很大，最简单的方法是把载体全序拿来瞅瞅，看 a，本身存在不止一个BamHI位点 b，载体本身发生了突变，需要更换载体（方法是用载体的通用引物去对载体测序)。 3你的载体切割完全，但是存在了不同的形态，这个还真的存在，但是比较少见 提供如下解决办法，按顺序试试 1酶切时间比较短，这个是通例，一般好歹切割5,6个小时.然后去看看电泳是否有两条带（也可以调整酶的浓度，增加酶量） 2查看载体序列，看是否存在多个酶切位点 3对载体进行测序，看载体是否发生了突变而生成了新的酶切位点 |
2楼2014-11-19 10:29:26
