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sallyquan

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[求助] 单酶切后出现两条距离很近的条带已有2人参与

我最近用BamHI单酶切我的载体，跑检测胶发现切开了，只有一条带，胶回收时发现有两条距离很近的带，且靠近点样孔的带偏暗。酶切时间37℃，40min.这是怎么么回事？是没有且彻底？

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1楼 2014-11-19 09:42:37

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youlinglyw

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【答案】应助回帖

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sallyquan(myprayer代发): 金币+3, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-11-19 12:18:45

可能原因如下，按照可能性依次下降排序：
1你的载体没有酶切完全，所以造成了你的电泳有两条带，一条是环形的载体，一条是线性的载体

2你的载体上存在不止一个BamHI位点，这个可能性很大，最简单的方法是把载体全序拿来瞅瞅，看
a，本身存在不止一个BamHI位点
b，载体本身发生了突变，需要更换载体（方法是用载体的通用引物去对载体测序)。

3你的载体切割完全，但是存在了不同的形态，这个还真的存在，但是比较少见

提供如下解决办法，按顺序试试

1酶切时间比较短，这个是通例，一般好歹切割5,6个小时.然后去看看电泳是否有两条带（也可以调整酶的浓度，增加酶量）

2查看载体序列，看是否存在多个酶切位点

3对载体进行测序，看载体是否发生了突变而生成了新的酶切位点