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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR得到单一条带后能不能不回收，直接酶切
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] PCR得到单一条带后能不能不回收，直接酶切 已有2人参与

PCR得到单一条带，没有二聚体，我能不能不回收，直接进行酶切回收？
      还有，进行双酶切是不是得保证buffer对两种酶的酶切效率是一致的？因为以前碰到过不同的酶对应不同buffer的酶切效率不一样，所以就必须得进行单酶切回收再单酶切，感觉有点麻烦。

PCR得到单一条带后能不能不回收，直接酶切
图片1.jpg
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼 2014-10-21 20:47:27
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peterrjp

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-22 12:25:21
单一条带不代表没有杂质。毕竟PCR反应体系里加了那么多试剂。
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2楼2014-10-21 21:07:51
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sun_in_night

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 鼓励交流 2014-10-22 12:25:24
其实是可以的。但是由于PCR产物中含有的体系于酶切不是最佳反应体系，所以可能影响酶切效率，这样就需要适当延长酶切时间以保证酶切效率。
并且直接酶切可能也会切断模板DNA，从而对后续实验造成影响，当然如果酶切后再切胶，就一般没问题了。

至于双酶切的问题，现在基本都有适于双酶切的buffer，找一个合适的就行。更别说有些公司的所有酶都用一个buffer的了。。。
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3楼2014-10-21 22:59:41
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cnzpli

金虫 (正式写手)
楼上正解

[ 发自小木虫客户端 ]
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4楼2014-10-21 23:05:25
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
3楼: Originally posted by sun_in_night at 2014-10-21 22:59:41
其实是可以的。但是由于PCR产物中含有的体系于酶切不是最佳反应体系，所以可能影响酶切效率，这样就需要适当延长酶切时间以保证酶切效率。
并且直接酶切可能也会切断模板DNA，从而对后续实验造成影响，当然如果酶切 ...

哦哦，谢谢。
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
5楼2014-10-22 08:04:08
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