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1楼 2014-11-14 20:22:45

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txing

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wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-15 14:44:07

也有可能模板浓度太高，引起太多非特异扩增

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4楼2014-11-15 08:49:00

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1、延伸时间过长；
2、凝胶成像仪灯调暗点，谢谢！

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永远相信未知的总是美好的！

9楼2014-11-15 15:17:48

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楼上正解，总之就是非特异的扩增

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急速潜航~

3楼2014-11-15 01:53:19

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4楼: Originally posted by txing at 2014-11-15 08:49:00
也有可能模板浓度太高，引起太多非特异扩增

一般50ul体系的话，模板加1ul可以吗？

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7楼2014-11-15 11:39:43

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2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-15 01:19:44
就是什么都没P出来
要么就是循环数太高了

但是感觉下面好像有条带，只是条带比较虚弱

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8楼2014-11-15 11:41:11

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forever909

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16楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-18 10:43:47
不会吧？！最不想发生的事还是得发生呀...

这个东西，即使你改进方法，也不会有很好的结果的，这个你可以试试减少点酶的量，那个泳道可能会好点，但是不会有什么实质性的变化的

快乐是最重要的。。。。。。

17楼2014-11-18 11:26:52

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yipu0222

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1. 降低模板浓度，按原来的1/5或 1/10分别P一次，这个不能按微升来，要按浓度来。
2. 提高退火温度，按2摄氏度的梯度增加试试。
这两方面调整一下，一般就没问题了。你试试看。
p.s. 上面太亮你就把光圈减小，看看上面是弥散的还是一个个条带，有助于分析。这么亮，要瞎了……

18楼2014-11-18 11:44:44

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模板量太多，先稀释十倍再试一下，大多数都是这个原因

27楼2015-04-17 09:33:34

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wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-15 14:43:57

就是什么都没P出来
要么就是循环数太高了

The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

2楼2014-11-15 01:19:44

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2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-15 01:19:44
就是什么都没P出来
要么就是循环数太高了

哦，谢谢，一般循环30次算不算高？

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5楼2014-11-15 11:38:45

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3楼: Originally posted by SundayMilk at 2014-11-15 01:53:19
楼上正解，总之就是非特异的扩增

除了提高退火温度，还要怎样避免这个问题呢

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6楼2014-11-15 11:39:17

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样品没有充分溶解吧！