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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测,泳道很亮是什么原因?已有13人参与

PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测,泳道很亮比条带还亮是什么原因?
     如图所示,见过这种现象的大神麻烦留下脚印。

PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测,泳道很亮是什么原因?
琼脂糖凝胶电泳结果.jpg
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喜欢生物,所以想好好研究下去!
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txing

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-15 14:44:07
也有可能模板浓度太高,引起太多非特异扩增
4楼2014-11-15 08:49:00
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zshw_001

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、延伸时间过长;
2、凝胶成像仪灯调暗点,谢谢!
永远相信未知的总是美好的!
9楼2014-11-15 15:17:48
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SundayMilk

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼上正解,总之就是非特异的扩增

[ 发自小木虫客户端 ]
急速潜航~
3楼2014-11-15 01:53:19
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
4楼: Originally posted by txing at 2014-11-15 08:49:00
也有可能模板浓度太高,引起太多非特异扩增

一般50ul体系的话,模板加1ul可以吗?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
7楼2014-11-15 11:39:43
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-15 01:19:44
就是什么都没P出来
要么就是循环数太高了

但是感觉下面好像有条带,只是条带比较虚弱
喜欢生物,所以想好好研究下去!
8楼2014-11-15 11:41:11
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forever909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-18 10:43:47
不会吧?!最不想发生的事还是得发生呀...

这个东西,即使你改进方法,也不会有很好的结果的,这个你可以试试减少点酶的量,那个泳道可能会好点,但是不会有什么实质性的变化的
快乐是最重要的。。。。。。
17楼2014-11-18 11:26:52
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yipu0222

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. 降低模板浓度,按原来的1/5或 1/10分别P一次,这个不能按微升来,要按浓度来。
2. 提高退火温度,按2摄氏度的梯度增加试试。
这两方面调整一下,一般就没问题了。你试试看。
p.s. 上面太亮你就把光圈减小,看看上面是弥散的还是一个个条带,有助于分析。这么亮,要瞎了……
18楼2014-11-18 11:44:44
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板量太多,先稀释十倍再试一下,大多数都是这个原因
27楼2015-04-17 09:33:34
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普通回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲,勿施于人

【答案】应助回帖


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wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-15 14:43:57
就是什么都没P出来
要么就是循环数太高了
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2014-11-15 01:19:44
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2014-11-15 01:19:44
就是什么都没P出来
要么就是循环数太高了

哦,谢谢,一般循环30次算不算高?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
5楼2014-11-15 11:38:45
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
3楼: Originally posted by SundayMilk at 2014-11-15 01:53:19
楼上正解,总之就是非特异的扩增

除了提高退火温度,还要怎样避免这个问题呢
喜欢生物,所以想好好研究下去!
6楼2014-11-15 11:39:17
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zhaoenze

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
样品没有充分溶解吧!
随缘
10楼2014-11-15 22:42:36
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