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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？
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forever909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-18 14:46:37
之前用这对引物扩增扩得挺好的呢，有时候偶尔会出现这个问题，而且有时候泳道很亮，但还是有目的条带，可以凑合着往下做吗？...

我看到你的条带了，目的条带是有的，凑合用是可以的，那就用一点新的RNA试试，会不会是RNA 污染了
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快乐是最重要的。。。。。。
21楼2014-11-19 09:06:42
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sunpeiguang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

拟扩增的是啥啊，根本就看不出来东西，建议使用同物种相似的体系扩增，基本上都差不多的。
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做自己想做的事情，哦也
22楼2014-11-19 09:33:14
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
21楼: Originally posted by forever909 at 2014-11-19 09:06:42
我看到你的条带了，目的条带是有的，凑合用是可以的，那就用一点新的RNA试试，会不会是RNA 污染了...

就是用刚提取的RNA进行反转录得到cDNA，再用该cDNA做模板进行PCR么？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
23楼2014-11-19 10:44:44
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小花猫阿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-15 11:39:17
除了提高退火温度，还要怎样避免这个问题呢...

你这样，设置几个退火循环，50度开始，前几个低一点，为了特异性扩增富集产物，后几个稍微高点，就可以了。
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24楼2014-11-19 12:45:22
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forever909

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-19 10:44:44
就是用刚提取的RNA进行反转录得到cDNA，再用该cDNA做模板进行PCR么？...

恩，就是cDNA进行PCR反应，其实我在想你可以先合成一个新的引物，然后在尝试这些的改进方法，实在不行就换引物，这样还不浪费时间
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快乐是最重要的。。。。。。
25楼2014-11-19 13:03:07
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难得6369

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
26楼2014-12-16 20:53:15
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板量太多，先稀释十倍再试一下，大多数都是这个原因
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27楼2015-04-17 09:33:34
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wzt1417

新虫 (小有名气)
我最近也遇到这个问题，楼主你解决了吗，求指教，非常感谢！！！！
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28楼2015-09-04 21:08:16
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

模板浓度太高，引物浓度太高，还有酶量太多等等

发自小木虫Android客户端
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29楼2015-09-04 23:17:09
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