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forever909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-18 14:46:37
之前用这对引物扩增扩得挺好的呢,有时候偶尔会出现这个问题,而且有时候泳道很亮,但还是有目的条带,可以凑合着往下做吗?...

我看到你的条带了,目的条带是有的,凑合用是可以的,那就用一点新的RNA试试,会不会是RNA 污染了
快乐是最重要的。。。。。。
21楼2014-11-19 09:06:42
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sunpeiguang

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

拟扩增的是啥啊,根本就看不出来东西,建议使用同物种相似的体系扩增,基本上都差不多的。
做自己想做的事情,哦也
22楼2014-11-19 09:33:14
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
21楼: Originally posted by forever909 at 2014-11-19 09:06:42
我看到你的条带了,目的条带是有的,凑合用是可以的,那就用一点新的RNA试试,会不会是RNA 污染了...

就是用刚提取的RNA进行反转录得到cDNA,再用该cDNA做模板进行PCR么?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
23楼2014-11-19 10:44:44
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小花猫阿

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-15 11:39:17
除了提高退火温度,还要怎样避免这个问题呢...

你这样,设置几个退火循环,50度开始,前几个低一点,为了特异性扩增富集产物,后几个稍微高点,就可以了。
24楼2014-11-19 12:45:22
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forever909

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
23楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-19 10:44:44
就是用刚提取的RNA进行反转录得到cDNA,再用该cDNA做模板进行PCR么?...

恩,就是cDNA进行PCR反应,其实我在想你可以先合成一个新的引物,然后在尝试这些的改进方法,实在不行就换引物,这样还不浪费时间
快乐是最重要的。。。。。。
25楼2014-11-19 13:03:07
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难得6369

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

26楼2014-12-16 20:53:15
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sh_9153

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板量太多,先稀释十倍再试一下,大多数都是这个原因
27楼2015-04-17 09:33:34
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wzt1417

新虫 (小有名气)

我最近也遇到这个问题,楼主你解决了吗,求指教,非常感谢!!!!
28楼2015-09-04 21:08:16
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

模板浓度太高,引物浓度太高,还有酶量太多等等

发自小木虫Android客户端
29楼2015-09-04 23:17:09
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