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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？
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korchagin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:17:27
你试试降低一下模板浓度，适当提高退火温度试试
模板浓度和退火温度可以做个梯度
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11楼2014-11-17 11:14:14
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人于两点

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:17:35
可以在体系中加DMSO，让其浓度达到《或=5%。
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12楼2014-11-17 16:13:06
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
11楼: Originally posted by korchagin at 2014-11-17 11:14:14
你试试降低一下模板浓度，适当提高退火温度试试
模板浓度和退火温度可以做个梯度

好。谢谢！
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
13楼2014-11-18 08:31:54
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
12楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-11-17 16:13:06
可以在体系中加DMSO，让其浓度达到《或=5%。

谢谢，DMSO的主要作用是什么呢？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
14楼2014-11-18 08:32:22
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forever909

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我以前也出现过这种情况，改进了很多东西，基本都没用，重新设计引物吧
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快乐是最重要的。。。。。。
15楼2014-11-18 09:05:38
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
15楼: Originally posted by forever909 at 2014-11-18 09:05:38
我以前也出现过这种情况，改进了很多东西，基本都没用，重新设计引物吧

不会吧？！最不想发生的事还是得发生呀
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
16楼2014-11-18 10:43:47
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forever909

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-18 10:43:47
不会吧？！最不想发生的事还是得发生呀...

这个东西，即使你改进方法，也不会有很好的结果的，这个你可以试试减少点酶的量，那个泳道可能会好点，但是不会有什么实质性的变化的
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快乐是最重要的。。。。。。
17楼2014-11-18 11:26:52
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yipu0222

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. 降低模板浓度，按原来的1/5或 1/10分别P一次，这个不能按微升来，要按浓度来。
2. 提高退火温度，按2摄氏度的梯度增加试试。
这两方面调整一下，一般就没问题了。你试试看。
p.s. 上面太亮你就把光圈减小，看看上面是弥散的还是一个个条带，有助于分析。这么亮，要瞎了……
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18楼2014-11-18 11:44:44
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
17楼: Originally posted by forever909 at 2014-11-18 11:26:52
这个东西，即使你改进方法，也不会有很好的结果的，这个你可以试试减少点酶的量，那个泳道可能会好点，但是不会有什么实质性的变化的...

之前用这对引物扩增扩得挺好的呢，有时候偶尔会出现这个问题，而且有时候泳道很亮，但还是有目的条带，可以凑合着往下做吗？
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
19楼2014-11-18 14:46:37
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
18楼: Originally posted by yipu0222 at 2014-11-18 11:44:44
1. 降低模板浓度，按原来的1/5或 1/10分别P一次，这个不能按微升来，要按浓度来。
2. 提高退火温度，按2摄氏度的梯度增加试试。
这两方面调整一下，一般就没问题了。你试试看。
p.s. 上面太亮你就把光圈减小，看 ...

谢谢！
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
20楼2014-11-18 14:52:26
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