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korchagin

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:17:27
你试试降低一下模板浓度,适当提高退火温度试试
模板浓度和退火温度可以做个梯度
11楼2014-11-17 11:14:14
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人于两点

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wu-ke-da(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-18 18:17:35
可以在体系中加DMSO,让其浓度达到《或=5%。
12楼2014-11-17 16:13:06
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
11楼: Originally posted by korchagin at 2014-11-17 11:14:14
你试试降低一下模板浓度,适当提高退火温度试试
模板浓度和退火温度可以做个梯度

好。谢谢!
喜欢生物,所以想好好研究下去!
13楼2014-11-18 08:31:54
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
12楼: Originally posted by 人于两点 at 2014-11-17 16:13:06
可以在体系中加DMSO,让其浓度达到《或=5%。

谢谢,DMSO的主要作用是什么呢?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
14楼2014-11-18 08:32:22
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forever909

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我以前也出现过这种情况,改进了很多东西,基本都没用,重新设计引物吧
快乐是最重要的。。。。。。
15楼2014-11-18 09:05:38
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
15楼: Originally posted by forever909 at 2014-11-18 09:05:38
我以前也出现过这种情况,改进了很多东西,基本都没用,重新设计引物吧

不会吧?!最不想发生的事还是得发生呀
喜欢生物,所以想好好研究下去!
16楼2014-11-18 10:43:47
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forever909

银虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-11-18 10:43:47
不会吧?!最不想发生的事还是得发生呀...

这个东西,即使你改进方法,也不会有很好的结果的,这个你可以试试减少点酶的量,那个泳道可能会好点,但是不会有什么实质性的变化的
快乐是最重要的。。。。。。
17楼2014-11-18 11:26:52
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yipu0222

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1. 降低模板浓度,按原来的1/5或 1/10分别P一次,这个不能按微升来,要按浓度来。
2. 提高退火温度,按2摄氏度的梯度增加试试。
这两方面调整一下,一般就没问题了。你试试看。
p.s. 上面太亮你就把光圈减小,看看上面是弥散的还是一个个条带,有助于分析。这么亮,要瞎了……
18楼2014-11-18 11:44:44
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
17楼: Originally posted by forever909 at 2014-11-18 11:26:52
这个东西,即使你改进方法,也不会有很好的结果的,这个你可以试试减少点酶的量,那个泳道可能会好点,但是不会有什么实质性的变化的...

之前用这对引物扩增扩得挺好的呢,有时候偶尔会出现这个问题,而且有时候泳道很亮,但还是有目的条带,可以凑合着往下做吗?
喜欢生物,所以想好好研究下去!
19楼2014-11-18 14:46:37
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

引用回帖:
18楼: Originally posted by yipu0222 at 2014-11-18 11:44:44
1. 降低模板浓度,按原来的1/5或 1/10分别P一次,这个不能按微升来,要按浓度来。
2. 提高退火温度,按2摄氏度的梯度增加试试。
这两方面调整一下,一般就没问题了。你试试看。
p.s. 上面太亮你就把光圈减小,看 ...

谢谢!
喜欢生物,所以想好好研究下去!
20楼2014-11-18 14:52:26
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