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2011jonathan

禁虫 (小有名气)

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vonstar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的19T应该用了有一段时间吧,我试过里面的酶反复冻融过5次以上,效果特别不好

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
12楼2014-11-03 00:24:39
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圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+3, 鼓励交流! 2014-11-02 21:59:30
内容已删除
7楼2014-11-02 21:44:13
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励交流! 2014-11-02 21:59:21
好歹应该有点自连的啊,楼主这个可能原因就很多了~
第一 有可能是你感受态的问题,感受态找个其他质粒验证一下效率,不好用的话就换吧
第二 楼主你好好看看抗生素有没有用错,不管是种类还是用量,PMD19T的话我记得是氨苄青霉素,100纳克/ml的终浓度吧
第三 你PCR扩增完之后做胶回收或者PCR回收没有?没有的话回收DNA之后再来做连接,同时记得片段/载体摩尔数比是3:1-5:1
4楼2014-11-02 12:12:58
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-04 22:50:29
1、感受态转化完活化了吗?
2、热击时间是不是过长了,我用pMD19-T连接2Kb片段,热击45s就够了。
3、无菌操作的时候有没有离酒精灯太近了,把菌烤死了,我师妹之前做的时候,害怕染菌就出现过这种情况。
你的问题是由于转化或者培养中那个地方没有注意到造成的。
9楼2014-11-03 00:10:49
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有,在感受态刚刚冻融时效果最好。但感受态细胞十分脆弱,要避免剧烈的操作,不要用枪头反复抽打混匀、涡旋、离心混匀,这样容易造成细胞破裂。只可以用手指轻弹EP管。
10楼2014-11-03 00:16:44
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SundayMilk

银虫 (初入文坛)

问下楼主用Extaq的理由?

[ 发自小木虫客户端 ]
急速潜航~
2楼2014-11-02 10:13:40
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)

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3楼2014-11-02 11:15:12
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小冀-

版主 (著名写手)

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西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-11-02 22:36:46
我最近也在连,也是遇到同样的问题,连不上,不过我的载体有几次都自连了···
···
5楼2014-11-02 12:38:55
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)

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6楼2014-11-02 14:02:17
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SundayMilk

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
作对照确定问题出在哪。

[ 发自小木虫客户端 ]
急速潜航~
8楼2014-11-02 23:52:29
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