应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆的片段连不上T载体怎么回事？？？
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
221/3返回列表123下一页
查看: 3122  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

2011jonathan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-11-02 09:40:05
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

vonstar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的19T应该用了有一段时间吧，我试过里面的酶反复冻融过5次以上，效果特别不好

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下(3人) 回复此楼
12楼2014-11-03 00:24:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

圆yy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2014-11-02 21:59:30
内容已删除
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2014-11-02 21:44:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+4, 鼓励交流！ 2014-11-02 21:59:21
好歹应该有点自连的啊，楼主这个可能原因就很多了~
第一 有可能是你感受态的问题，感受态找个其他质粒验证一下效率，不好用的话就换吧
第二 楼主你好好看看抗生素有没有用错，不管是种类还是用量，PMD19T的话我记得是氨苄青霉素，100纳克/ml的终浓度吧
第三 你PCR扩增完之后做胶回收或者PCR回收没有？没有的话回收DNA之后再来做连接，同时记得片段/载体摩尔数比是3:1-5：1
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2014-11-02 12:12:58
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-11-04 22:50:29
1、感受态转化完活化了吗？
2、热击时间是不是过长了，我用pMD19-T连接2Kb片段，热击45s就够了。
3、无菌操作的时候有没有离酒精灯太近了，把菌烤死了，我师妹之前做的时候，害怕染菌就出现过这种情况。
你的问题是由于转化或者培养中那个地方没有注意到造成的。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2014-11-03 00:10:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

还有，在感受态刚刚冻融时效果最好。但感受态细胞十分脆弱，要避免剧烈的操作，不要用枪头反复抽打混匀、涡旋、离心混匀，这样容易造成细胞破裂。只可以用手指轻弹EP管。
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2014-11-03 00:16:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

SundayMilk

银虫 (初入文坛)
问下楼主用Extaq的理由？

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
急速潜航~
2楼2014-11-02 10:13:40
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011jonathan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2014-11-02 11:15:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 应助指数-1, 无应助 2014-11-02 22:36:46
我最近也在连，也是遇到同样的问题，连不上，不过我的载体有几次都自连了···
赞一下 回复此楼
···
5楼2014-11-02 12:38:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2011jonathan

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
6楼2014-11-02 14:02:17
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

SundayMilk

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
作对照确定问题出在哪。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
急速潜航~
8楼2014-11-02 23:52:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 2011jonathan 的主题更新
221/3返回列表123下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 293分求调剂，外语为俄语 +4 加一一九 2026-04-07 6/300 2026-04-07 21:14 by hmn_wj
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +8 努力奋斗112 2026-04-06 8/400 2026-04-07 19:41 by macy2011
[考研] 材料调剂 +12 一样YWY 2026-04-02 14/700 2026-04-07 12:52 by Sammy2
[考研] 0703调剂 +16 拾玖壹 2026-04-04 18/900 2026-04-07 12:49 by flydream1314
[考研] 265求调剂 +17 小木虫085600 2026-04-06 19/950 2026-04-07 12:04 by Sammy2
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +7 晚风不晚 2026-04-04 7/350 2026-04-06 14:06 by houyaoxu
[考研] 301求调剂 +7 细胞相关蛋白 2026-04-03 7/350 2026-04-06 11:47 by lijunpoly
[考研] 求调剂 +10 chenxrlkx 2026-04-05 10/500 2026-04-06 11:31 by 猪会飞
[考研] 272分求调剂 +4 wangyile2233 2026-04-02 4/200 2026-04-05 22:21 by 286640313
[考研] 296求调剂 +3 汪！？！ 2026-04-05 5/250 2026-04-05 17:38 by 蓝云思雨
[考研] 323求调剂 +8 李佳乐1 2026-04-04 8/400 2026-04-04 22:26 by hemengdong
[考研] 341求调剂 +3 洛多罗 2026-04-02 4/200 2026-04-04 21:36 by 智能智慧
[考研] 求调剂，一志愿南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +10 @taotao 2026-04-03 10/500 2026-04-04 09:01 by T可可西里T
[考研] 322求调剂 +4 FZAC123 2026-04-03 4/200 2026-04-03 20:55 by zhq0425
[考研] 数一英一285求调剂 +7 AZMK 2026-04-03 9/450 2026-04-03 13:03 by ms629
[考研] 303求调剂 +3 一色清羽 2026-04-02 4/200 2026-04-03 10:22 by 蓝云思雨
[考研] 279求调剂 +6 qazplm0852 2026-04-02 6/300 2026-04-03 10:03 by 蓝云思雨
[考研] 土木304求调剂 +4 兔突突突， 2026-04-02 5/250 2026-04-02 21:16 by 兔突突突，
[考研] 285求调剂 +8 AZMK 2026-04-02 11/550 2026-04-02 20:16 by yulian1987
[考研] 279求调剂 +5 傅文秋 2026-04-02 5/250 2026-04-02 18:10 by 笔落锦州
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭