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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 克隆的片段连不上T载体怎么回事？？？
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vonstar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
2011jonathan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:26:10
你最好用19T里面提供的对照再试一下，先确定试剂或感受态是不是有问题

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11楼2014-11-03 00:21:58
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vonstar

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

你的19T应该用了有一段时间吧，我试过里面的酶反复冻融过5次以上，效果特别不好

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12楼2014-11-03 00:24:39
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
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13楼2014-11-03 08:47:39
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
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14楼2014-11-03 08:51:26
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
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15楼2014-11-03 08:54:16
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2011jonathan

禁虫 (小有名气)
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16楼2014-11-03 08:55:23
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awsqwasq

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
2011jonathan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:26:23
试一试TaKaRa的LA Taq酶。。保真性会高一点。。我们这边连T载体都用这个，不用EX Taq
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17楼2014-11-04 11:30:50
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hihe99

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 2011jonathan at 2014-11-03 09:55:23
想问下，连接产物加入感受态后，不吹打只用手指轻弹管壁的话能混匀么，谢谢！...

可以，我都是轻弹的，转化步骤有问题，感受态应该附带了质粒的，用那个做个阳性对照，那个能出来的话说明不是转化的问题
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18楼2014-11-04 12:35:33
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tayifeita

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
2011jonathan(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-05 14:26:32
Extaq，连接酶，t载，还有感受态都换一遍试试，目的片段回收后所融的溶液是否对dna连接酶有干扰？一般试剂盒回收后应该是没问题的。如果实验材料没问题的话那就说转化操作有问题咯，换个人做

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19楼2014-11-05 08:40:26
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DoRbIr

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
16楼: Originally posted by 2011jonathan at 2014-11-03 08:55:23
想问下，连接产物加入感受态后，不吹打只用手指轻弹管壁的话能混匀么，谢谢！...

放心吧，可以的，关键问题是如果吹打效率很低的
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20楼2014-11-05 08:57:49
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